猪肠型大肠杆菌病的诊断方法

1、诊断方法

新生仔猪和断奶仔猪肠型大肠杆菌病的诊断包含不同诊断程序的联合应用，从观察临床症状和眼观病变开始，随后进行适当的细菌学调查以及对分离的细菌菌株定性。

1.1 临床症状、眼观病变和采样

由于肠毒性大肠杆菌造成的新生仔猪腹泻最常见于0～4日龄的仔猪，通常呈地方性流行；头胎母猪所产仔猪可能更容易感染，因为它们缺少被动免疫的保护（所以头胎母猪一般建议产前进行两次疫苗免疫）。

由大肠杆菌造成的断奶仔猪突然腹泻，通常见于断奶后2周～3周的仔猪，但是见于断奶后6周～8周的仔猪也并非特例。

当肠毒性大肠杆菌(Enterotoxigenic E.coli，ETEC)造成新生仔猪腹泻时，我们可以观察到发病仔猪会出现大量水样或含有凝乳块的腹泻，散发出特征性气味，颜色通常呈白色或黄色。

由ETEC引发的断奶仔猪大肠杆菌病通常以淡黄色、灰色或淡粉色水样腹泻和特征性气味为主，病情通常持续1周。

感染猪通常表现为精神沉郁、食欲减退和被毛粗乱黏湿。发病猪可能会出现突然死亡，尤其是在疾病暴发伊始。死猪通常脱水，且眼窝深陷；小肠通常扩张、轻度水肿和充血。新生仔猪或断奶仔猪发生大肠杆菌病后，胃通常膨胀，且分别充满凝乳块或干饲料，基底部充血(图3)。肠系膜淋巴结肿大，且通常充血。这些病变虽然不具有特异性病征，但仍提示肠型大肠杆菌病。因此，对患有大肠杆菌病的新生仔猪和断奶仔猪进行剖检，可帮助病理学者选择后续的实验室检查方法。

最有效的方法是选择腹泻、发病时间不足12h～24 h的一定数量(3头～5头)的未治疗病猪，处以安乐死并进行精准剖检，从而评价眼观病变(评价小肠、结肠、回肠瓣膜、肠系膜淋巴结)并采样。采集未剖开且两端系扎的小肠(尤其是回肠和空肠)和大肠样本，并送至实验室(新鲜样本用于细菌学检验，10％福尔马林缓冲液固定的样本用于组织学检查)，细菌学检验要求分离引发疫病的致病性大肠杆菌菌株，定量(进行或不进行纯化培养)、定性和评估对抗生素的敏感性。新鲜样本应当在4 ℃下储存，且应在采样后 24 h内送达实验室保存。

近期自发死亡的仔猪也可以用于微生物学分析。由于机体死亡后消化道会迅速自体分解，因此从死亡后4 h～6 h的仔猪上采集的组织样本通常不适合进行组织病理学分析。如果安乐死或近期死亡的猪未表现出肠型大肠杆菌病的典型临床症状，建议对3头～5头猪采集粪便样本(直接从动物体内采集，而不是采集排泄在地板上的粪便)或直肠拭子。

对多种检查结果汇总后方能确诊，包括：细菌学定量测定、致病因子鉴定(通常采用PCR方法)，以及将病理学检查作为补充分析，从而对观察到的显微病变与检测到的病原进行综合的判读。列出了在诊断肠型大肠杆菌病时应当遵循的诊断树状图和诊断标准。

猪肠型大肠杆菌病的诊断方法

1.2 细菌分离株的细菌学检测和鉴定

肠型大肠杆菌病的诊断是以肠道管腔内容物(首选)或直肠拭子样本的细菌学检测为基础的。样本应接种于血琼脂和麦康凯琼脂或者其他对肠杆菌科细菌具有选择性的培养基，如HE琼脂。这些选择性培养基可以将能够发酵乳糖(如大肠杆菌)的与不能发酵乳糖的革兰氏阴性肠杆菌区分开。固体培养基上的菌落在培养1 d内达到它们原有的大小，有光滑型或粗糙型或黏液型的区别。血琼脂上菌落的生长特征以及在选择性培养基上的乳糖发酵能够给出第一个判别性标志。特别是，不仅在新生仔猪腹泻上而且在断奶仔猪腹泻中，溶血菌落的存在通常被用作ETEC腹泻的快速诊断工具。总的来说，从新生仔猪大肠杆菌病病例中分离的ETEC在血琼脂平板上可能会出现溶血(ETECF4阳性)或非溶血(ETEC F5、ETEC F6和ETEC F41)菌落。从断奶仔猪腹泻病例中分离的ETEC虽然也可观察到非溶血菌株，但大多数为溶血菌株(ETEC F4或ETEC F18)。在最近的一项研究中，研究人员报告称从鉴定为ETEC的断奶仔猪腹泻病例中分离到的大肠杆菌菌株有97.6％为溶血菌株。剩余的2.4％非溶血ETEC分离株在法国、意大利和德国分离到，拥有相同的致病型别：F4、STa和STb，这些分离株全部进行了溶血活性检测。