（检测技术）猪场病料采集和送检注意事项

动物疫病诊断、病理学分析、流行病学调查和免疫评价结果的准确性主要取决于动物病料样品的科学采集，而实验室检测和诊断结果的准确性、有效性除受实验方法、检测试剂、实验设备和人员等因素的影响外， 还要受到样品的采集，运输、保存等因素的影响。本文对动物检疫样品的采集原则、保存和运输主要环节、病料处理方法等进行了简要的介绍。

一、 猪场病料的采集原理

1.1  病料要具有典型性

病料样品的典型性主要考虑两个方面，第一方面是典型动物，主要指的是没有经受过药物治疗且病状典型的动物，在此情况下出现典型性的病状表明该病疫具有明显的传染性，该动物样品的科学采集，对该病的确诊和研究具有特殊的意义;第二方面是典型病料，典型病料主要指的就是病原体含量最多的组织部位，在一般的情况下，采集动物病料样品前，专门采集人员都会对检疫动物所患的病症进行一般性的判断，并从动物身上采集病原体侵害最为严重的组织部位进行诊断和研究，同时为了确保检疫结果的准确性和全面性， 其他病变不显著的病变组织和病原嗜性部位(比如淋巴结、水泡、咽喉等)也要进行采集，心、肺、肝、淋巴等，无论有无病变，都应该采集。

表1 猪病毒性疾病检测项目表

检测病原

检测方法

检测样品

口蹄疫（FMD）

RT-PCR

水泡液、淋巴结、脊髓、水泡皮

猪瘟（CSF/HC）

RT-PCR

淋巴结、脾脏、肾脏、扁桃体

猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）

RT-PCR

支气管、肺脏、全血

猪圆环病毒2型（PCV2）

PCR

淋巴结、肺脏

猪伪狂犬（PR）

PCR

流产胎儿、脑组织、肺脏

细小病毒病（PP）

PCR

产胎儿、胎盘、阴道分泌物

日本乙型脑炎（JE）

RT-PCR

血液、脑脊髓液

猪流感（SI）

RT-PCR

肺、气管及分泌物、鼻腔拭子

流行性腹泻（PED）

RT-PCR

小肠及其内容物

传染性胃肠炎（TGE）

RT-PCR

小肠和胃及其内容物

轮状病毒（RV）

RT-PCR

小肠及其内容物

塞尼卡病毒A

PCR

水泡皮

表2 猪细菌性疾病检测项表

病原名称

检测项目

检测方法

检测样品

猪链球菌（S.S）

链球菌细菌分离

平板法、染色镜检、PCR鉴定

肺脏（带气管）肝、关节液、脓汁、血液

副猪嗜血杆菌病（H.Ps）

副猪嗜血杆菌病

平板法、染色镜检、PCR鉴定

肺脏（带气管）、关节积液、胸腹腔渗出液

猪萎缩性鼻炎（Bm）

波士杆菌

平板法、染色镜检、PCR鉴定

鼻腔后部和气管分泌物、肺

猪肺疫(Pm）

多杀性巴氏杆菌

平板法、染色镜检、PCR鉴定

肺脏（带气管）、淋巴结

仔猪黄痢、白痢、水肿病（E.coli）

致病性大肠杆菌

平板法、生化试验

肝脏、肠内容物

猪喘气病（M.Hy）

肺炎支原体

试管法、PCR鉴定

肺脏、气管

猪沙门氏菌（SM）

沙门氏菌

平板法、染色镜检、PCR鉴定

肺脏（带气管）、肝脏、肠内容物

猪传染性胸膜肺炎（APP）

胸膜肺炎放线杆菌

试管法、染色镜检、PCR鉴定

肺脏、气管、胸腔渗出液

1.2  病料采集要保持无菌操作

采集病料，应全程无菌操作。特别是，微生物检查、血清学检查涉及的样本。采集前后要对采集设备进行反复清洗，采集结束后要进行清洁消毒，遵守无菌操作的规程，以免因为杀菌不彻底导致的检疫结果出现误差。无菌采集的样品，使用的器械、容器等等，严格消毒处理，严格遵守相应的无菌操作流程。

1.3  料采集要遵守适时性

采集病料前要初步制定计划，把握得当。尤其夏季，采集不能超过4h。时间过长的，可能会导致病料组织腐烂生长出杂菌，难以诊断出疫病引发的病原。必要时，应急宰早期发病的活体组织，自其身上获取病料组织。血液样品在采集前一般禁食8h。

1.4  安全采集病料

采集样本过程中，应注意操作的安全性，同时做好人身防护，严防人畜共患病感染;应防止污染环境，防止疫病传播，扩大感染面积，做好环境消毒和病害肉尸的处理。

二、 病料组织处理

为了确保动物检疫结果的真实性与可靠性，除了采取正确的病料样品采集方法以外，还要使用正确的病料处理方法对样品进行有效的处理。主要可以通过细菌检查材料、病理组织学检查材料、血清学检查材料、病毒学检查材料等集中方法进行处理。进行病理组织学检查，用 10%福尔马林液或 95%酒精等固定，固定液体积应为病料的 10倍，如用 10%福尔马林固定组织经24h必须更换一次新鲜溶液。神经系统组织需使用 10%福尔马林，并加入 5%～10%的碳酸镁;病毒学检查，用50%的甘油，缓冲盐水保存病料组织。需进行组织学检查的材料，最好配合使用包音氏液;血清学检查无菌采集动物体内的血液，将其注入无菌试管内。室温环境下，静置1h。之后，放置4℃环境下，做冷藏处理;细菌学检查，病料组织，需用灭菌的液状石蜡，或30%的甘油缓冲盐水，浸泡处理。

三、 病料及检测样品的保存及送检

病料采集最佳采集时间为动物死后4h以内进行(尤其是夏季)，以防尸体腐败，对检测结果产生影响。采集好的病料应装在无菌的病料容器中，密封容器、标号、送样。如果病料不能马上送检的，可保存于30~50% 甘油缓冲液中保存;血清样品不能及时检测的，应保存于-20℃冰柜中。棉拭子放入加了双抗的pH为7.2的PBS液的2ml离心管中，密封管口、标号、送样。 如果自行开车送检：车程4h内，可以简单包装后送检，夏季炎热高温情况下，放冰袋保持低温环境;4h车程外，建议使用保温箱，里面放置保冰袋进行包装运送。 如果物流或客运运输：运送病料时尽量选择运输速度快的交通方式，保证所采集的病料能在规定时间内及时送达，另外还需注意，对外包装进行加固处理，防止样品压碎、摔烂。

四、 采样人员的安全防护

近年来，致人发病乃至死亡的人兽共患病的事件在世界各地常常发生，我国也是人兽共患病的多发区。兽医工作人员接触患病动物频繁，是人兽共患病的高危人群，因此，更应替惕人兽共患病对兽医工作人员的感染。工作人员在采集病料时更应该提高生物安全防护意识，工作时戴口罩、穿工作服(防护服)、戴手套，接触患畜或其粪便等污染物后要勤洗手和消毒，保持良好的工作习惯，同时保持工作环境中空气流通。

五、完善送检样品信息

为了能真实的反应客观的情况，及时准确的追根溯源，必须要保证采样样品信息真实、详细、准确。 采样单的填写包括：受检单位名称、地址、联系方式;畜禽种类、性别、年龄、免疫状况(免疫时间、疫苗类型、生产批号、生产厂家等);所采集样品名称、数量、保存状态、标号;填写需要检测的项目，同时还需详细记录被采样动物的临床症状、剖检变化、排泄物状态以及用药情况等;采样人和被采样人均应签字，最后记录采样日期。

综上所述，按照正确的病料采集和送检要求不仅可以提高疫病诊断的速度，还能有效的提高疫病检查的准确性。因此，在动物疫病评估中，不仅要遵守病料样品采集的基本原则，还要按照相关要求及顺序对病料进行处理，同时要根据检疫现场与患病动物的实际情况，采用最佳的方法对患病动物进行疫病的检查，确保检疫结果的准确性和真实性。

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