公猪精液质量的评定方法2

四、外形

精子的外形和顶体完整同样对精子的生存力有影响。就估计精液质量而言，评定精子外形比评定精子活力更能体现精液质量。这两个参数和精子活力在精液质量评定时都至关重要。它们一起决定精液的取、舍。

运动的精子可能外形上不正常；但是，运动力低的精子可能受精。然而，没有顶体的精子不可能受精。用这三个参数标准评定精液质量就很可能低估了精液真正的受精能力和公猪精液质量。

正如精子的活力，精子的外形评定表明：在使用人工授精时，需要一个确定正常精子外形百分数提高母猪繁殖率。研究资料还表明：精子常规评定使用的是外形这个参数。如果是使用精液，那么正常形态精子百分数小于70%的精液应认为是劣质精液。由于正常形态精子百分数在储存期将减少，而且由于在公猪个体间差异较大。所以，当使用长期储存(>24h)的精液时;最初处理的精液的正常形态的精子百分数要达在70%以上。

在检查精子活力同时可以粗略地对精子外形进行评定。然而，理想的外形检测要使用显微镜，它能区分精子的各个部分。精确地评定精子的外形是通过分别计算正常精子头部、微滴和尾部数。吸取1-2滴精液按1：10与稀释剂混合，使用显微镜(400倍或1000倍)观察，外形百分数可以直接计算出来。如果精液不可能立即被检测(<30分钟)，应先用0.5-1毫升生理盐水固定或保存在载玻片上。除了保存样品，精子同时被固定。因此，更容易观察。可以观察湿的样本或者制成干的固定的标本再进行观察。头部、尾部和胞质畸形的精子计为不正常的精子。尽管有近端小滴(靠近头部)的精子对精液质量评定的影响较小。然而，当近端小滴迅速增加时，用产仔率和产仔数来衡量的繁殖力将逐渐降低。在采集的精液中末端微滴比近端小滴更易被发现，末端小滴的影响似乎与近端小滴一样。尽管一些资料认为公猪精液细胞质微滴的影响是有限的。

五、顶体完整性

顶体膜覆盖精子头部的三分之二，它含有穿透卵母细胞所必需的酶。顶体完整性的评定很费时,需要比较先进的显微镜，并且要有熟练地操作技能。一些研究表明：顶体完整性比精子的活力在评定精子质量方面更具有代表性。顶体完整性检查与精子外形检查的方法一样。然而，在检测单个精子细胞时应该先把载玻片放在显微镜下，然后观察精子顶体层的差别。顶体完整率小于51%的精液认定为劣质的精液，即使精液的受精率可能是处于同一水平。顶体的完整性评定使用与活力和形态学评定一样的原理。当精液被长期保存时，正常顶体百分数小于51%精液的受胎率可能很低。活力，外形，或顶体完整性的评定乎并不能完全估计繁殖力，但是它却是精子生存能力的基本表现。与公猪的射精能力预测产仔数和受胎率相比，以上所述的估计方法是通过消灭劣质的精液来影响受胎率和产仔数。

在外观评定中使用染色剂

粗略地外观评定单个公猪精液是必需的;然而，定期详细地检测可能提供了一种有效质量监控方法，以确保精液粗略地评定是否与精液真实外观质量相符。详细地外观评定要使用显微镜，有时需要使用染色剂对精子细胞进行染色。与总外形检测相比，它在高倍镜头(1000x：油浸)下对单个精子细胞进行检测。详细地外形检测时，头部、中部和尾部应分开计算。首先曙红染色剂(商用外形染色剂)与精液按1：1混合制成载玻片涂片。这样就能充分区分精子头部形态的微小差别。通常是计算100个总精子细胞，然后计算出正常精子细胞所占百分数，其它在外观检查使用的染色剂有：精子头部染色威廉士染色剂、顶体染色的萘酚黄和红霉素染色剂。