国内猪链球菌2型疫苗的研究与生产动态

近日，我国四川资阳、内江等地感染的猪链球菌2号疫情引起了举国上下一致关注。截至8月1日12时，四川省累计报告人感染猪链球菌病病例198例，其中实验室确诊38例，临床诊断107例，疑似53例。这些病例中，治愈出院18例，病危30例，死亡36例。

什么是猪链球菌病？

猪链球菌病是一种人畜共患的急性、热性传染病，由C、D、E及L群链球菌引起的猪的多种疾病的总称。猪链球菌感染不仅可致猪败血症肺炎、脑膜炎、关节炎及心内膜炎，并且通过伤口、消化道等传播途径，可感染特定人群发病，并可致死亡，危害严重。目前，科学家发现猪链球菌共有35个血清型，毒力最强的依次为2型、1型、9型和7型，目前感染人的主要是2型。

我国猪链球菌2型疫苗的生产与研究进展在此次疫情发生之前，我国尚未生产猪链球菌2型疫苗，但有部分相关的研究报道。

江苏省农业科学院畜牧兽医研究所曾在2001年对猪链球菌2型进行了动物致病性试验研究。研究人员选取猪链球菌2型SS2－1、SS2－H、SS2－006444、SS2－7和SS2－N株，对BALB/c小鼠、猪、兔和普通小白鼠致病性进行试验，其中SS2－1、SS2－H、SS2－006444、SS2－7株对BALB/c小鼠半数致死量（LD50）分别为2.1×106、3.1×107、5.3×107和9.4×107，SS2－N株以2．8×108个活菌攻击对BALB/c小鼠不能致病；SS2－1株对猪LD50为4.2×107，对猪半数感染量（ID50）为1.33×106,用8.0×108活菌对兔及普通小白鼠感染均不能致病。结果表明：猪链球菌2型人工感染可引起BALB/c小鼠和猪发病；其毒力因子溶菌酶释放蛋白（MRP）和细胞外因子（EF）的表现型与其对BALB/c小鼠的致病性无相关关系；BALB/c小鼠可用于猪链球菌（2型）病疫苗免疫试验的动物模型。

该研究所2002年报道的猪链球菌2型制苗候选菌株SS2－1和SS2－H的培养稳定性检测，将SS2－1和SS2－H株在血平板上连续传代至第41代，并分别检测第1代、第11代、第21代、第31代和第41代菌株的菌落及细菌形态、生化特性、溶菌酶释放蛋白（MRP）和胞外因子（EF）等指标。结果：从第1代至第41代，2株细菌的菌落及细菌形态、生化特性、MRP和EF均没有发生变异。这表明SS2－1和SS2－H菌株培养稳定性较好，使用限定代次至少可达41代，可作为理想的疫苗生产菌株。

浙江大学在对猪链球菌2型分离株生物学特性进行系统研究的基础上，研制出针对浙江省流行菌株血清型的猪链球菌多价油乳剂灭活苗，一次免疫后抗体效价可以维持3－4个月，对猪链球菌2型分离强毒株玫击具有较好的保护效果。该油乳剂灭活苗在省内规模化猪场中试近60万头，猪链球菌病发病率与同期相比平均下降了88.3%，免疫后未出现任何不良反映，取得了较好的免疫保护效果。

上海市畜牧兽医站和上海市嘉定区种畜场应用琼扩法（AGP）、间接ELISA法检测猪链球菌病氢氧化铝二联灭活疫苗免疫猪的抗体水平。结果表明，免疫后4天开始产生抗体，7天时免疫猪100%抗体阳转，15～30天抗体效价达高峰。免疫后35天进行二免，二免后5天抗体效价均显著升高，6个月后血清抗体仍维持在1:1600。母猪二免可使仔猪获得高水平且持勺的抗体，35日龄其母源抗体仍保持在 1:800。通过免疫抗体与攻毒保护相关性测试，抗体效价在1:800（含1:800）以上能抵抗1×107CFU马腺疫链球菌兽疫亚种和1×108CFU猪链球菌2型的强毒攻击。

南京农业大学动物医学院和上海市畜牧兽医站通过动物试验，从10株马链球菌兽疫亚种和猪链球菌2型分离株中筛选出毒力强、免疫原性好的ATCC35246和HA9801株，作为制备疫苗用的生产菌株。对3种不同培养基、血清浓度、葡萄糖浓度、静置和振荡培养、培养基预热等对细菌生长的影响进行了比较。结果表明，用含有2%犊牛血清、0.2%葡萄糖的改良马丁肉汤培养基较为合适；温度对细菌生长的影响很大，培养基接种前预热可以提高细菌产量；振荡培养对细菌生长的影响不大。以上述生产菌株制备得到的氢氧化铝胶二联灭活疫苗，经过无菌及安全检验合格，肌肉接种仔猪，每头2mL。免疫15天后，对HA9801和ATCC35246的保护率分别为100%（26/26）和92.3% （24/26）。用二联灭活苗免疫后4周内仔猪体内抗体水平持续上升，从第5周开始逐渐下降；再次免疫后，抗体水平迅速回升，120天后仍维持较高水平。攻毒保护试验和抗体消长规律的测定显示，制备的猪链球菌病二联灭活苗具有良好的免疫保护作用。

浙江医学高等专科学校和浙江省畜牧管理局等报告了2003年秋季浙江省某猪场2型猪链球菌感染猪群的微生物学检查和药物敏感试验结果，以及采取的控制疫情措施及其效果。从112头病、死猪中分离出的71株2型猪链球菌分离株，对阿莫西林、氨苄青霉素、环丙沙星、先锋V号、青霉素G等5种抗生素敏感，但对复方新诺明、克林霉素、庆大霉素、四环素、卡那霉素、链霉素和恩诺沙星等7种抗生素耐药。通过采取饲养环境和饲料消毒、发病猪隔离、阿莫西林和环丙沙星治疗、未发病猪疫苗接种等措施，有效地控制了疫情，未发生人的感染。

由于猪链球菌疫苗生产要求的条件很严格，并存在一定的风险性，经国家农业部严格筛选，广东永顺生物制药有限公司成为目前国内唯一生产猪链球菌2型疫苗的厂家。据新华社报道，首批猪用猪链球菌2型灭活疫苗已于7月31日在广州正式出厂，并在同日下午从广州空运到四川成都。

由四川疫情引发的思考

近年来，非典、禽流感、猪链球菌病等人畜共患疾病的连续发生，无不警示动物防疫工作的严峻性。香港特区政府卫生福利及食物局8月1日宣布，猪链球菌被列为必须呈报的传染病，有关条文将于8月8日刊宪并生效。北京、上海、广东、陕西、黑龙江、湖南等地迅速落实了各项监测防控措施，一系列动物防疫条例法规相继出台。种种迹象表明，全社会对动物防疫工作给予了极大的关注，齐心协力打好疫病防治攻坚战。