猪场主要疫病抗体水平监测及免疫效果分析

随着畜禽养殖业规模化、集约化和商品化程度的增高，畜禽流动和引种工作的频繁，一些疾病的发生、发展变得越来越复杂。一些疫病屡控不止，时有起伏；部分传统疫病非典型化且临床症状日渐复杂；新的病毒感染性疫病日渐增多；一些传染病的免疫失败经常发生，引起兽医工作者极大的关注。猪瘟是严重危害养猪业最古老的疾病之一，近年来，非典型化猪瘟逐渐增多。猪伪狂犬病(PR)自1902年首先在匈牙利发现以来，世界上已有50多个国家存在，我国有20多个省、市流行本病，近来呈不断蔓延之势。猪蓝耳病又称猪繁殖和呼吸综合征(PRRS)，可感染各种年龄阶段猪。自1987年在美国首次发现以来，随后加拿大、德国、荷兰、英国、法国、日本等陆续报道本病流行。我国除台湾外，1996年才报道，但短短几年时间，很多省份都报道本病不同程度存在。近来，很多大型猪场均发生以母猪流产、产死胎、弱仔、木乃伊胎等病例，大多由该病原引起。为了摸清规模猪场中猪瘟抗体水平和免疫状况，猪伪狂犬病、猪蓝耳病阳性率和分布情况，有重点地开展相应的免疫预防，我们检测了杭州市24个规模猪场911份血清中的猪瘟、猪伪狂犬及猪蓝耳病抗体，现报道如下。

1 材料和方法

随机取样，采自杭州地区24个规模养猪场(未经猪伪狂犬病及猪蓝耳病疫苗免疫)，其中母猪血清621份，肥育猪207份，种猪(此处专指种公猪，以下同)83份，血清分离后置冰箱2l℃保存备用。

猪瘟正向间接血凝抗原、阴性和阳性血清，购自中国农科院兰州兽医研究所，试剂批号为：2001019。

猪伪狂犬病、猪蓝耳病ELISA诊断试剂盒购自美国IDEXX公司，试剂批号为06685-330FT和09265-089HT。

96孔血凝板，购自浙江华东医药公司。

猪瘟血清抗体水平的检测，采用正向血凝试验。具体操作步骤如下：即在％孔血凝板上，每孔加入50ul稀释液，每排第1孔加入待检血清50ul，递比稀释待检血清至血清浓度为1：512，最后50ul丢弃。再在每孔加入抗原诊断液25ul，置湿盒中于25℃孵育1.5-3h，判定结果。

判定标准：凡能使50％的红细胞凝集的血清最大稀释倍数为该份血清的抗体效价，猪瘟血清抗体效价高于或等于1：16视为免疫合格。

猪伪狂犬病、猪蓝耳病抗体检测参照美国IDEXX公司ELISA诊断试剂盒说明书进行。待检血清分别作1：20(猪伪狂犬病抗体检测)和1：40(猪蓝耳病抗体检测)稀释。取稀释好的待检血清100ul加入包被好的96孔聚苯乙烯诊断试剂盒中，置湿盒内25℃作用30min，取出，用洗涤液充分洗涤3-5次，甩尽残留液体，每孔加入酶标抗体100ul，湿盒内2.5℃作用30min，洗涤。再在每孔中加入TMB底物溶液100ul，湿盒内25℃；作用15min后，加入终止液100ul，立即置BIO-RAD550型酶标仪上650nm处测定。分别按所附计算公式判定是否为血清抗体阳性。

2 结果

2.1猪瘟的免疫状况

母猪、肥育猪、种猪猪瘟血清抗体效价如表1所示。在所测试的608份母猪血清中，有3份(0.49％)血清样品检测不到猪瘟抗体，45份样品猪瘟血清抗体低于1：8，占检测总数的7.4％；有563份样品猪瘟血清抗体大于或等于1：16，占92.6％；在所测试的157份肥育猪血清中，大于或等于1：16的血清份数为98，免疫合格串为62.4％；78份种猪血清中，有61份血清抗体水平高于或等于1：16，占总数的韶.2％。猪瘟免疫合格率排列顺序为母猪>种猪>肥育猪。

猪血清中猪瘟抗体效价分布和免疫效果。在所有的843份猪血清中，有5份猪瘟血清抗体效价为0，占总数的0.6％，有722份猪瘟血清抗体水平高于、等于1：16，免疫合格率为85.64％。所调查的24个大型猪场，猪瘟免疫效果相差较大，免疫合格率为57.14％—100％不等。但绝大多数场免疫水平较高，有14个猪场猪瘟免疫合格率大于或等于90％。以猪场猪免疫合格率大于80％以上计为猪场免疫合格，则有凹个猪场猪瘟免疫合格，占83.33％。可见，规模猪场猪瘟的免疫效果还是比较好的，具体结果见表1、2。

表1 母猪、肥育猪和种猪猪瘟血清抗体效价及其分布

抗体血清份数 所占百分比／％

效价-------------------------- ---------------------------

母猪 肥育猪 种猪 合计 母猪 肥育猪 种猪 平均

1:0 3 2 5 0.51.3 0 0.6

1:2 3 21 6 0.51.3 1.3 0.7

1:4 5 19 8 32 0.812.110.3 3.8

1:8 34 36 8 78 5.622.910.3 9.3

1:1658 38 15 1119.524.219.2 13

1:3286 24 8 11814.1 15.310.3 14

≥1:64 41936 38 49368.9 22,948.7 58.5

合计608157 78

表2 24个规模猪场猪瘟免疫状况

免疫合格率／％猪场数占百分比／％

-----------------------------------------

90-10014 58.3

80-90 6 25

70-80 1 4.2

60-70 1 4.2

≤60 2 8.3

2.2 猪伪狂犬病抗体阳性检出率

在所检测的24个规模场中，共有20个场检测出伪狂犬病抗体，占总数的83.33％。911份血清中，365份血清呈伪狂犬病抗体阳性，占整个检测样品的40.07％，其中母猪、肥育猪、种猪伪狂犬病抗体阳性率分别为50.24％、29％、24％。具体结果见表3。

表3 PRV及PRRSV血清抗体阳性检出率

猪种 PRV抗体 PRRSV抗体

-------------------------------------------

阳性数阳性率／％阳性数阳性率／％

母猪 312 50.24 220 35.4

肥育猪 2914.01 100 48.3

种猪 2428.9 4250.6

合计 365 40.07 362 39.74

2.3 猪蓝耳病抗体阳性检出率

24个规模场中，共有17个场检测出蓝耳病抗体，场阳性率达70.33％。在911份血清中，猪蓝耳病抗体阳性份数为362份，占39.74％，与伪狂犬病相差无几。其中母猪、肥育猪、种猪阳性率分别为35.4％、48.3％、50.6％。具体见表3。

3 讨论

本研究表明，从整体上看猪瘟的免疫状况较好，以猪瘟抗体间接血凝价在1：16以上时能抵抗强毒感染为参考，大多数猪场和猪群能达到这个水平。但也有部分猪场的少数猪，猪瘟抗体滴度低下，不足以抵抗强毒侵袭而发病或成为隐性带毒者，威胁易感猪群。这可能与猪瘟疫苗免疫程序不合理和免疫质量不好有关。

调查中发现，猪伪狂犬病抗体阳性场达20个，占整个调查场数的83.33％。其中母猪抗体阳性率非常高，为50.24％，种猪、肥育猪分别为14.01％和28.9％，情况非常严峻。近期，很多猪场均发生以母猪流产、产死胎、木乃伊胎、弱仔及仔猪出生后几日内急性死亡病例，经诊断大多为此病引起。由于伪狂犬病可感染各种年龄阶段猪，又可致猪隐性带毒；近来，其毒力和侵袭力有呈动态的持续渐增趋势，并且，病毒的传染链中有鼠类参与，给净化和净化保持带来了相当的难度。实验室和田间试验都已证明PR野毒间、野毒与活苗毒株有重组现象。有些场采用灭活苗和基因缺失苗免疫接种，效果欠佳。但不论怎样，小群内清除感染，使用基因工程致弱活毒苗及相容的血清学试验来区分疫苗抗体和野毒感染诱导产生的抗体是必要的。总的来说，对猪伪狂犬病阳性猪场和受威胁猪场建议使用疫苗，但应同时加强血清抗体监测，监测疾病流行情况和发病区域。非流行场应以清除感染猪只为主，加强净化。

前几年我省较为少见的猪蓝耳病，近来发病率渐增。此次调查显示，24个规模养殖场，猪蓝耳病抗体阳性场达17个。在所调查的911头猪血清样品中，母猪蓝耳病抗体阳性率为35.4％，肥育猪为48.3％，种猪为50.6％。由于本病主要引起猪繁殖障碍，症状易与猪伪狂犬病、猪瘟混淆，病毒易于扁桃体、上呼吸道和肺泡内巨噬细胞和树突状细胞内寄生复制，降低猪体免疫力。进而继发或伴发其他病原微生物如衣原体、猪链球菌、副嗜血杆菌、猪放线杆菌等感染，加剧病情，导致临床症状变化多样、死亡率升高，给本病的确诊带来很大困难。PRBS病毒在扁桃体和肺内可存在3周到1年的时间，康复猪通过呼吸道、唾液腺、粪便、尿及精液散毒。在以后的3-6个月或更长的时间内可能成为其他猪感染的来源，造成该病的持续存在。因此，加强对该病的诊断试剂和防制措施的研究乃当务之急。目前，对该病的防治由于无特效药，仍以预防为主。同时，PRRSV是抗体依赖性感染病毒，因此，在生产中盲目使用疫苗特别是弱毒疫苗是不可取的。应加强猪群的血清学监测，特别是引种过程中的检测，坚持猪群全进全出制，严格隔离、检疫、消毒工作，逐步淘汰阳性猪，进而达到净化目的。

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