某养猪场一例猪流行性腹泻病的诊断与治疗全过程

猪流行性腹泻(PED)是由猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起的猪病毒性腹泻疫病，是严重危害养猪业的重要疫病之一，给世界各国的养猪业造成了巨大经济损失。山东惠民县某养猪场发生了以哺乳仔猪水样腹泻、并伴有呕吐等特征的疑似猪流行性腹泻疾病，现将诊治过程报告如下。

1、发病情况

发现有哺乳仔猪(3-21 日龄)呕吐、腹泻、脱水。同圈仔猪发病率达100%，不同圈发病仔猪死亡率在11.1%-30.0%。用抗生素治疗无效。

2、临床症状

发病哺乳仔猪普遍精神沉郁，食欲下降，水样腹泻、个别仔猪伴有呕吐，仔猪普遍偏瘦，但体温正常。

3、病理变化

剖检病死仔猪发现：小肠扩张、肠壁变薄，肠内充满黄色液体，肠系膜淋巴结水肿。

4、病毒分离鉴定

4.1 病料采集

取病死仔猪小肠黏膜、内容物及水样腹泻粪便作为分离病毒的样品，将样品冷冻保存。

4.2 病料处理

将采集的样品用灭菌PBS 研磨，反复冻融，在4 ℃条件下3000 r/min离心30 min、吸取上清，将上清液用0.22μm 一次性滤器过滤除菌、分装保存于-80 ℃备用。

5、病毒的RT-PCR 鉴定

5.1 引物设计

根据GenBankJN825712.1 序列设计，扩增长度661 bp，用于鉴定猪流行性腹泻病毒。引物序列如下：上游引物：CGGTTCTATTCCCGTT下游引物：GAAGCACTTTCTCACTATC

5.2 病毒的RT-PCR

提取病料的RNA，并同时提取PEDV 阴性对照( 细胞培养液) 及PEDV 阳性细胞毒的RNA。病毒RNA用宝生物工程( 大连) 有限公司提供的RNA 提取试剂盒提取，一步法RTPCR反应成分及反应程序如下。