猪瘟及猪大肠杆菌混合感染的诊断

1 病理剖检

皮下组织（脂肪、肌肉）普遍出血，肺脏部分出血、瘀血，心脏外膜、内膜和冠状沟有大小不等的出血点。脾脏周边梗死呈暗紫色。肾脏呈土黄色，皮质部有散在针尖大的出血点，髓质出血。颌下淋巴结、肺门淋巴结、肠系膜淋巴结肿大、出血，切面呈红白相间的大理石样。喉头、气管出血。胃底黏膜大面积出血、溃疡，小肠黏膜出血，黏膜水肿，部分脱落，壁较薄，胃、肠内容物腥臭，结肠黏膜出血、溃疡。

2 病原诊断

2.1 猪瘟荧光抗体诊断取病死猪扁桃体和肾组织放入BRIGHT冰冻切片机冷冻、切片若干张附着在载玻片上，用丙酮固定15 min，自然干燥后，在载玻片上滴加猪瘟荧光抗体。放在湿盒中37℃作用30 min，PBS浸洗3次，每次5 min，自然干燥后，在暗室里用荧光显微镜镜检，在切片组织胞浆中可见到亮绿色和黄绿色的荧光显现，由此证明该病死猪的脏器中含有猪瘟病毒。

2.2 细菌的分离鉴定

(1)取病死猪的肺、肝、脾、肠系膜淋巴结无菌操作接种到普通琼脂培养基中，放入恒温箱37℃培养24 h。琼脂培养基菌落灰黄色、不透明、圆形凸起、边缘不整齐、大而湿润，挑取单个菌落革兰氏染色镜检呈革兰氏阴性短粗的杆菌，长约3 μm，宽0.4 μm。挑取单个菌落接种到麦康凯和肉汤培养基，37℃培养24 h，麦康凯培养基菌落呈红色，肉汤培养基中呈均匀混浊生长。

(2)用菌液腹腔接种2只小鼠，每只注射0.15 ml，取无菌生理盐水0.15 ml腹腔接种小鼠做对照。接种菌液的小鼠分别在18 h和22 h死亡，剖检小鼠可见心肌、肺脏出血，肝瘀血，脾脏出血，小肠黏膜出血，将病料接种到麦康凯培养基上37℃培养24 h菌落呈红色。对照组小鼠健康。

(3)挑取普通琼脂菌落混均于0.5%氯化钠溶液做成菌悬液，于病原性大肠杆菌分组OK(或OB)多价血清与O分型血清做玻片凝集，与OK分型血清发生凝集而与O分型血清不凝集说明该菌株有K抗原，然后将菌液于100℃水域中加热15 min，破坏K抗原，在与OK与O分型血清检查得知该菌属于O101