猪流行性感冒确诊方法

流行病学及临床症状和病理变化诊断

1．病毒分离技术。尽早采取发病2-3天急性病猪的猪鼻拭样品（鼻腔分泌物）、气管或支气管的渗出物作为病料，进行病毒分离，采集的病料应放人适宜的运输培养液（生理盐水、甘油盐水）中，如果样品在收集后48h内能进行病毒分离，则应保存在4℃以内。待检材料按常规处理后，接种于9 -11日龄鸡胚或犬肾细胞(MDCK)上，33 -37℃培养3-5天后，采取羊水或细胞培养物作血凝试验。如阳性，则进一步作m凝抑制试验以确定其亚型，如连传3-5代仍无血凝特性，则可以判为阴性。

2．血凝抑制( HI)试验。使用双份血清，第一份血清样品采于病猪的急性期，第二份采于2-3周后恢复期。如果恢复期血清的抗体效价比急性期血清高4倍以上，就可以诊断为猪流行性感冒.

3．酶联免疫吸附试验( ELISA)。ELISA试验程序：纯化病毒抗原包被一加入1：40稀释的待检血清( 30min)一加入酶标抗体( 30min)一加入底物(15min)一加入终止液并测定OD650nm值。该方法的特异性达到99.7%。

4．荧光抗体实验(IF)。荧光抗体实验( FA)用于检测冷冻的肺部病灶区的流感病毒。主要是流感病毒NP或M抗原。用-P抗原的荧光抗体染色，主要出现核内荧光；M抗原荧光主要出现胞质荧光。将已与荧剂相结合的猪流感抗体滴加在肺组织的冰冻切片然后在显微镜下对切片进行观察，可鉴别被病毒感染的细胞。

5．分子生物学诊断技术猪流感病毒的聚合酶链式反应( PCR)检测方法，目前正用于检测和区分流感病毒。