追寻仔猪腹泻难防难控的根源

由肠毒素性大肠杆菌引起的仔猪腹泻在我国及世界各地均有发生，每年死亡的仔猪中约有50%与此有关。随着养猪业向规模化发展，饲养密度不断增加，仔猪大肠杆菌性腹泻有明显上升的趋势，我国大多数省、市、自治区均有不同程度的发生与流行，该病已成为养猪业一个有重要经济意义的疾病。目前，对于仔猪大肠杆菌性腹泻病的防治主要是以注射疫苗以及应用抗菌药物为主要手段，但随着抗菌药物长期大量广泛应用，大肠杆菌耐药株不断出现，耐药谱不断扩大，使得大肠杆菌病成了疫病防制中的一大难题，严重困扰着养猪业的健康发展。为控制大肠杆菌的蔓延，加强对大肠杆菌耐药机制的研究迫在眉睫。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1试验菌株

来自河北省邯郸市、秦皇岛市、张家口市等10个不同市县的已经过系统鉴定和致病性检验的猪源大肠杆菌40株。

1.1.2标准质控菌株

大肠杆菌ATCC25922由本校预防兽医学实验室保存。

1.1.3培养基及药品试剂

Mueller-Hinton（MH）培养基、LB肉汤、入DNA/HindⅢ、琼脂糖、TAE、凝胶载样缓冲液、22种药敏纸片购自杭州天和微生物试剂有限公司；相关试剂配置均按常规方法配置。

1.1.4仪器

TGL-16型高速台式离心机；凝胶成像分析系统（BIO－BEST200E）；净化工作台（SW-CJ-ZFD双人单面）；恒温培养振荡器（ZHWY-103B）。

1.2方法

主要是抗生素敏感性试验。采用NCCLS推荐的琼脂扩散法（K-B）测定已经生化鉴定和致病性检验的40株猪源大肠杆菌对22种常用抗菌类药物的敏感性。从培养了16～24h的麦康凯琼脂平板上，挑出单个菌落，直接用生理盐水制成0.5麦氏单位。在15min内，用无菌棉拭子蘸取调好的菌液，在MH琼脂培养基表面涂布接种，将确定好的药敏纸片分贴到平板表面。纸片一旦与平板接触，不应再移动。37℃培养18～20h以后，测量各药敏纸片抑菌圈直径，同时以大肠杆菌ATCC25922进行质控。参照NCCLS（2009）公布的标准以敏感、中介、耐药3种形式对抑菌圈作出判定，个别NCCLS（2009）没有列出但我国人医或兽医仍使用的药物按杭州天和微生物试剂有限公司提供的标准解释，