口蹄疫如何鉴别诊断

口蹄疫的临诊症状主要是口、鼻、蹄、乳头等部位出现水疱。发疱初期或之前，猪表现跛行。一般情况下主要靠这些临诊症状可初步诊断，但表现类似症状的还有猪水疱病、猪水疱疹(SVE)、水疱性口炎(VS)。因此，最终确诊要靠实验室诊断。

病原学诊断

1．病毒分离鉴定病毒分离鉴定的首选病料是未破裂或刚破裂的水疱皮(液)，对新发病死亡的动物可采取脊髓、扁桃体、淋巴结组织等。将病料悬液冻融2次，4℃过夜(至少4h)浸毒。以3000r/min离心15min，除菌后取上清接种细胞。或加1/3体积氯仿混合摇振数分钟，以3000r/min离心15min，取上清液装入试管中，加棉塞，4℃过夜，氯仿挥发后，接种单层细胞。每份样品接种2～4瓶细胞，另设对照2～4瓶。37℃静止培养48～72h。每天观察记录，对照细胞形态应基本正常或少有衰老。接种了样品的细胞如出现FMD病毒典型病变(CPE)，要及时取出并置-30℃冻存。无CPE的细胞瓶要观察至72h，其后置于-30℃冻存作为第1代细胞/病毒液再盲传，至少盲传3代。凡出现CPE的样品判定为阳性，无CPE的为阴性。为了进一步确定分离病毒的血清型，将出现CPE的细胞/病毒液用间接夹心ELISA等检测方法定型。

2．补体结合试验(CFT)CFT是根据抗原-抗体系统和溶血系统反应时均有补体参与的原理设计的，以溶血系统作为指示剂，限量补体测定病毒抗原。当病毒抗原与血清抗体发生特异反应形成复合物时，加入的补体因结合于该复合物而被消耗，溶血系统中没有游离补体将不发生溶血，试验显示阳性。

3．病毒中和试验(VNT)口蹄疫病毒血清型划分的依据是型间无交叉免疫保护性，VNT是型别鉴定的重要方法之一，其检测结果可靠，缺点是动用活毒，且用时较长，只能在专门的实验室中进行，无法推行于普通实验室。

4．反向间接血凝试验FMD反向间接血凝试验是将口蹄疫病毒抗体以化学方法偶联于醛化的绵羊红细胞上，当贴附于血细胞上的抗体与游离的抗原相遇时，形成抗原抗体凝集网络，绵羊红细胞也随之凝集，出现肉眼可见的红细胞凝集现象。反向间接血凝试验可作为FMD病毒抗原型别鉴定的初步方法，该方法简便、快捷，适合于田间使用。目前该法仅在前苏联国家和我国使用，西方国家很少应用，也未列入国际推荐方法。

5．反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)PCR具备实验诊断所要求的最重要的3个要素：①敏感，可将原样品放大上百万倍，使原本少得难以探察到的(Pg级)样本扩增到能在紫外灯下肉眼可见；②特异，核酸片段与引物间的序列互补，使反应呈高度特异；③操作简单快速。RT-PCR检测的目标物是FMD病毒的RNA，通常以病毒材料为被检样品，可对各种动物组织和细胞来源的病毒材料进行检测，扩增到的PCR片段测定核苷酸序列后，可以确定所属的基因型和基因亚型，进而追踪疫源。

6．间接夹心ELISA国际口蹄疫参考试验室建议，检测口蹄疫病毒血清型应优先采用间接夹心ELISA，OIE和FAO也一致推荐使用该方法定型诊断。

抗体检测

通过检测动物体液中(主要是血清)特异性抗体，可对FMD病毒感染与免疫状况做出诊断，通常采用病毒中和试验和ELISA方法，这两种方法也是国际贸易中指定方法。FMD病毒抗体检测可用于以下几个目的：

①诊断急性感染，用同一试验检测急性期和康复期猪血清样品，血清抗体阴转阳或抗体滴度急剧上升表示发生了感染，但诊断的前提是猪无疫苗接种史。

②证实猪未被感染，用于国际贸易。

③在流行病学调查中检测感染情况；④支持疫病扑灭计划和后期检测；⑤接种疫苗后效价测定。值得提示的是免疫猪有时抗体滴度很低，甚至检测不到抗体，但攻毒后仍能保护。

新诊断技术进展

FMD诊断检测技术正在不断地改进和创新，已从血清学诊断技术领域扩展到了分子生物学诊断技术领域。这些新技术的最大优点体现在简便、快速、精确、灵敏以及高通量化。