断乳猪多系统消耗综合征最新研究进展

断乳猪多系统消耗综合征(post-weaning mul-tisystemicwasting sydrom，pmws)主要的致病因子为圆环病毒ⅱ(pcv2), 该病有6 个基本的临床症状：衰竭或难以茁状成长、呼吸困难、淋巴结肿大、腹泻、苍白和黄疸[1]。由于不清楚确切的发病原因及流行病学，pmws给养猪业带来了巨大的经济损失，英国每年因pmws损失达2 100 万英镑[2]，据来自2002年12 月英国动物健康论谈的资料显示，英国每年花费在两种消耗性疾病pmws、pdns(猪肾炎皮炎综合征)上的经费约为3 100 万英镑。据估计，发生pmws的农场，每卖1 头猪损失大约在10.39 英镑[3]。本文将对pmws的病原学、流行病学等最新的研究进展作一简要叙述。 1 病原学

1.1 形态及分类圆环病毒是一种小的、二十面体对称、无囊膜、单股环状dna病毒，直径14～17 nm，是目前发现的最小的动物病毒。pcv2属圆环病毒科、圆环病毒属。1974年，德国人tischer发现，在多株连续传代的pk-15细胞中存在一种类似小rna病毒的圆形小颗粒病毒，该病毒可持继感染pk-15细胞，但不引起cpe。1982年，他证实并命名为猪圆环病毒。1997年，allan用从pmws病料中分离到的病毒接种未感染的 pk-15，结果分离到圆环病毒，称它为pcv2，而将以前从 pk-15中分离到的圆环病毒称为ⅰ型(pcv1)。目前所分离到的pcv2各毒株，用单克隆或多克隆抗体检查，在抗原上都“相似”。在genbank上发表的各毒株的同源性介于91.1%～100%，aa保守性在90.2%～100%之间，相对较保守。

1.2 理化性质关于pcv2理化性质的报道较少。pcv在cscl中的浮密度为1.37 g/cm3，沉降系数为52 s。pcv对外界环境及各种消毒药抵抗力较强，在ph值为3 的酸性环境中很长时间不被灭活，56 ℃不能灭活，70 ℃能存活15～30 min，对苯酚、季胺类化合物、氢氧化钠和氧化剂等较敏感[4,5]，对氯仿不敏感。美国爱阿华州大学对11 种消毒药品所作的独立的研究表明，virkon s(1∶100)对pcv2及其协同抗原ppv有很强的杀灭作用[6]。

1.3 pcv2的分子生物学特征pcv2有两种基因组，一种1767，一种1768，目前分离到的各毒株间同源性均在95%以上。pcv1与pcv2同源性为68%。pcv2共有11 个阅读框(表1)，这些阅读框表现为基因重叠，从而充分利用了pcv有限的遗传物质。11 个阅读框中 orf1、5、7、10 的‘5—3’方向相同，orf2、3、4、6、8、9、11 的‘5—3’方向相同，有学者认为 orf1、2、3、6、7有一定的同源性，其余orfs无任何的同源性。

orf2编码234 个aa，编码蛋白是pvc2囊膜的主要结构成分，liu q等用免疫荧光方法和位点突变分析方法研究了pcv2-orf2在细胞中的定位，发现orf2n端第12～18 个，第34～41 个aa域在pcv2在细胞核内定位中起着重要作用。truong等利用免疫相关性b-细胞表位，借助于elisa确定了orf2编码蛋白(cap)的两个抗原表位，分别位于其所编码的aa的69～83 处和117～131处，这两处对于cap是特异的。所以他将orf2抗原表位作为自然感染猪及试验猪血清学检测的标志。liu q等将orf2基因连接到mbp-his(8)-tag基因3’端，在大肠杆菌中表达了orf2融合蛋白，该融合蛋白可以与pcv2抗血清反应，这表明可以用orf2 来区分pcv1与pcv2。将pcv2的orf2克隆到杆状病毒表达载体上，在昆虫细胞内以该基因进行表达，表达产物的分子量为30 kd，与从纯化的病毒粒子中检测到的蛋白大小相似，在电镜下能观察到orf2蛋白可以自我装配成病毒衣壳样颗粒。orf1是最大的阅读框，编码315 个aa，编码病毒的复制蛋白(rep)，分子量大小为37 kd，与病毒的复制转录有关[7,8]。

1.4 pcv2的复制方式及培养特性研究证实，pcv的复制方式为滚环式，先复制出一个rf(复制型)，然后由双链rf转录和编码蛋白。

cv2能在pk-15细胞上生长，不能引起细胞病变。感染的pk-15细胞内含有许多胞浆内包涵体，少数感染细胞内有核内包涵体。allan(1997)报道，在接种pcv的pk-15细胞培养物中加入300 mm的d-氨基葡萄糖-hcl作用30 min，可以促进pcv的复制。pcv不能在原代胎猪肾细胞、恒河猴肾bhk-21细胞上生长。有报道，pcv也能在vero细胞及其他猪源代细胞糸上生长。

2 流行病学

mws在全世界都有发生。1991年首次报道于加拿大。对猪血清中pcv2抗体所作的回顾性检测及对猪组织样本所作的回顾性检测表明，pcv2抗体至少从1969年起就已存在于猪群之中了。目前已证实，在西班牙和英格兰自1986年以来就已存在pmws的定性散发病例[1]。西班牙学者j segales等认为[9]，按照血清学观点，

cv2分布于全世界，欧洲不同国家的资料显示几乎100%的猪群呈血清学阳性，这表明pmws发病和不发病的猪群都发生了pcv2感染。在法国的一次现场研究中，观察到发生pmws的大部分猪来自少数几窝，推断这可能是一种“窝效应”。另一份法国报告证明去势公猪比母猪对pmws更易感，西班牙也有类似现象的报道。出生重和断乳重较低的猪发生pmws的频率较高。有证据表明，如果你的农场距发病农场在3 kg之内，那么你的农场发病的可能性就会比别人高9倍[10]。越来越多的证据表明，pcv2不是一种新的病毒，pmws也不是一种新的疾病。

1～6月龄猪均可发病，2～3.5月龄多发。有报道哺乳小猪也可自然发生pmws。发病率在4%～30%，常见20%～60%。死亡率在5%～25%较常见。

v能够诱发pmws的临床症状[11,12]，并且ppv对消毒剂具有高度抵抗力[13]。

rrsv和pcv2的协同作用在田间试验中得到了证明[14]。目前，大多数猪场同时遭受pcv2和prrsv 的病毒感染，在美国达到20%～60%[15,16]。

在有些病例中，免疫刺激可以增加pcv2感染猪的pmws发病率及严重程度。如krakowka用不完全佐剂匙孔透明血蓝蛋白刺激悉生猪，结果所有感染pcv2 且免疫刺激的猪均发生pmws，而单独感染pcv2的猪则未发生[17]。allan[18]对cf猪接种了两种广泛应用的疫苗,结果接种疫苗的猪21%发生pmws，而没有接种的猪却没有发病。但最近在欧洲利用spf猪做试验却没能证明免疫刺激对于接种了pcv2的猪有何影响[19]。

国内流行情况：朗洪武等(2000)用elisa方法对我国 7 个省22 个猪群559 份血清进行了检测，总阳性率为 42.9%[20]。朗洪武等(2001)在北京、河北疑似pmws猪群中，分离出2 株pcv2病毒。杨汉春等(2002)在北京周边地区疑似pmws猪群中分离出3 株pcv2。王忠田等(2002)对北京、山西等地规模猪场调查发现11 个猪场发生由pcv2感染引起的pmws，表明pmws在我国规模化猪场中发病越来越多。杨汉春分离到的pcv2毒株与美州分离株的亲缘关系较近，而与法国、荷兰等欧州分离株的亲缘关系较远，提示北京及其周边地区分离株的出现可能与近年来从国外引种猪有关。

国外流行情况：加拿大、美国、法国、英国、意大利、北爱尔兰、西班牙、新西兰、丹麦、韩国、日本等国家和地区均有本病报道。韩国1999～2000年pmws阳性率为8.1%，比前两年增加了50%[21]，在法国的布列塔尼，自1995年以来，该地区有100 个猪群发病，死亡率高达50%。美国、韩国、英国等在实验室已成功复制本病，有证据表明，pcv2能水平传播，也能垂直传播[9]。

3 临床症状

mws有6 个基本的临床症状组成初步临床诊断的依据(如前述)。其他较少看到的症状包括咳嗽、发热、胃溃疡、中枢神经系统障碍和突然死亡。有些临床症状可能部分由于继发感染导致或加剧。

4 病理组织学变化

剖检变化：不同程度的肌肉萎缩；淋巴结异常肿大，切面坚硬呈均匀的苍白色；肺肿胀，无弹性；肝发暗，萎缩；肾苍白水肿；肓肠和结肠黏膜充血、出血；胃无腺区形成溃疡。

组织学变化：特征变化为不同程度的淋巴细胞(t、b)减少，淋巴器官的肉芽肿炎症。典型变化为淋巴结、回肠淋巴集结、扁桃体、脾的多灶肉芽肿炎症。在上皮样巨噬细胞和多核巨噬细胞的细胞质和细胞核内有双染性包涵体。感染猪的淋巴结在20 dpi(days post inoculation)时有肉芽肿炎症，24 dpi更严重，淋巴结内成熟的淋巴细胞已耗尽，取而代之充满了嗜碱性固缩的细胞核及邻近细胞核的破裂残骸。生发中心减小或消失。17 dpi，出现淋巴空泡，10、17 dpi时，肝脏组织细胞间隙有引起炎症的渗透物。肾脏和心肌层，除了很少几处有组织细胞渗透物外，其他正常。肺病变以多灶性组织细胞肺炎为特征(通过扩散巨噬细胞渗透物实现的)[22]。

5 发病机理

cv2是导致pmws的必要病原，免疫系统的全身性刺激(病原体prrsv、ppv的共同感染；免疫刺激；环境因素；其他应激因素)是pcv2感染猪诱发pmws的一种必要条件。同时pcv2在某些环境下是猪继发性免疫缺陷的一种重要原因。

kim.j et al[22]用pcv2-ppv(韩国分离株)感染普通cd猪(colostrnm-depried)，证明病毒最初是经扁桃体的巨噬细胞进入机体，首先在巨噬细胞内复制，接下来3 d内发展成病毒血症。pcv2、ppv在外周单核细胞内复制，达到一定程度，然后导致细胞相关的病毒血症及病毒在全身淋巴组织的分布。

cv2、ppv二者都是单链小的dna病毒，它们都有一个小的编码容量，所以它们对宿主细胞有较强的依赖作用[23，24]。 krakowka[25]等报道，在体内，新的细胞 dna合成是pcv2合成的唯一条件，病毒在细胞静止和激活期都不能复制。在s期进行有丝分裂，新dna合成，组织细胞的增殖以及被ppv诱导的巨噬细胞提供了pcv2复制及扩散的最佳条件。pcv2对巨噬细胞的亲合性可能对二种病毒的复制及由于细胞活素的产生而导致的炎性细胞募集中起着重要的作用。

免疫抑制的机理[9]：pcv2在免疫应答细胞中繁殖的直接效应。免疫细胞集聚的环境中病毒增殖的间接效应。更为特异的是病毒通过干扰抗原递呈、诱导、凋亡和类似细胞细胞活素的作用或抑制或扰乱细胞活性网和抑制补体成分的活性。

免疫缺陷的表现：对抗生素治疗缺少应答；窝猪效应的存在；其他不常见疾病的存在或寻常情况时非致病性继发性微生物产生严重感染；淋巴细胞缺失，淋巴组织的巨噬细胞浸润是pmws病猪的独特性病理损害和基本特征；血液循环中b、t细胞减少，白细胞抗原 2类分子的表达增加，周围血液和淋巴组织中的巨噬细胞/单核细胞谱系增多；pcv2导致细胞凋亡；pmws病猪的肺和肠中发现卡氏肺孢子虫，曲霉、衣原体、这些为条件性病原体，常与免疫抑制有关；许多pmws猪也有细菌引起的肺败血性感染，如多杀性巴氏杆菌、副猪嗜血杆菌。

6 诊断

6.1 pmws的确诊需3 个准则存在与pmws一致的临床症状；存在特征性的组织病理学损害；在感染猪组织的病损内能检出pcv2，对pmws最有价值的诊断组织的淋巴组织。

6.2 诊断方法

6.2.1 免疫荧光法(ifa) 利用间接免疫荧光来检测pcv，可进行pcv检测和分型，检出率97.14%。

6.2.2 elisa 用pcv2特异性单克隆抗体作为竞争试剂成功地建立了竞争elisa方法，检出率99.58%。但由于pcv2已在猪场广泛存在，所以检出结果不能作为pmws的决定性依据。

6.2.3 pcr方法复合pcr、巢式pcr。

6.2.4 核酸探针及原位杂交方法 pcv2-orf1负链探针对pcv2的两种基因型均可检出。而pcv2-orf2负链探针可以用来区分pcv1、pcv2。有人建立了快速加强杂交缓冲液做杂交仅用7～8 h，而传统方法为2 d。

7 防制

在欧洲应用一种独特的血清疗法获得了极大的成功，但在全球其他地区尚未应用[26,27]。pmws的治疗和控制首先要提供良好的生产管理来降低应激[28,29]，消除潜在的刺激免疫系统的诱发因素[30]，如果确定有ppv，pmws发病前，用ppv灭活苗接种2 次，11 群猪收到了实质性效果，而prrsv，则效果不定[9]。

madec报道，采用分批分娩方式，将断乳猪死亡率由20.3%降至5.8%。dennis[9]也获得相似的结果，由23.6%～5.3%。

由法国学者madec等提出的20 点紧急计划(内容略)，现已被广泛采用来防制pmws。