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猪病毒性腹泻的诊断方法和检测技术

农信网 2023-01-08 02:52:01 养猪 705

猪病毒性腹泻的诊断方法和检测技术

病毒性腹泻类疾病是猪场常见疾病,目前已成为危害养猪业最大的一类疾病之一。腹泻一般有明显的季节性,尤其在秋冬、冬春换季,天气骤变时易发且流行速度快。主要通过消化道及呼吸道进行感染,随后诱发全群猪腹泻。几种病原混合感染比较常见,各年龄段的猪均可发病,发病后的死亡率与年龄密切相关,日龄越小,病程越短,死亡率越高,其对我国的养殖业造成了巨大的经济损失,严重影响经济效益。本文介绍该类疾病的可能病因、鉴别诊断方法和分子生物学检测技术

猪病毒性腹泻的病原目前主要有猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪丁型冠状病毒(PDCoV)、猪轮状病毒(RV)、猪博卡病毒(PBoV)等,均可导致猪发病,以呕吐、腹泻、脱水为主要特征,仔猪的发病率和死亡率可高达50%~100%。另外猪的伪狂犬病毒(Pseudorabies,PRV)、圆环病毒、大肠杆菌和温和型猪瘟病毒(classical swine fever,CSFV)也可以引起仔猪腹泻,这需要我们逐一细致地分析病因,通过流行病学、临床诊断和实验室检测进行综合诊断。

1 病毒性腹泻的临床诊断

从临床诊断上看,PEDV、TGEV、PDCov、RV、PBoV的症状比较相似,难以区分。但是PRV和CSFV与另外几种病毒性腹泻存在一定的区别。

1.1 PEDV、TGEV、PDCov

这3种疾病的病原都属于冠状病毒科,病毒特性、病猪发病特点、临床症状和病理变化非常相似:1至3日龄发病,一周内病死或淘汰率可达到100%。乳猪和小猪严重腹泻、水样拉稀,部分猪有呕吐,吃奶后发病更严重。部分中大猪和母猪呕吐和腹泻,但死亡率不高。病变一般只集中在胃肠道,胃肠黏膜菲薄、充血,肠系膜淋巴结充血。PDCov引发的病例不多,但是在国外和国内都有单纯由该病毒引起的腹泻大暴发的病例报道。

1.2 猪伪狂犬病

感染伪狂犬病毒的发病猪会整窝发病和死亡,表现为突然发病,体温上升达41 ℃以上,精神极度委顿,发抖,运动不协调,痉挛,呕吐,腹泻。表现出明显的神经症状、昏睡、呜叫、呕吐、腹泻,一旦发病,1~2 d内死亡。剖检主要症状是肾脏布满针尖样出血点,其他肉眼病变不明显。中枢神经系统症状明显时,脑膜明显充血,脑脊髓液量过多,肝、脾等实质脏器常可见灰白色坏死病灶,肺充血、水肿和坏死点。

1.3 温和型猪瘟

感染温和型猪瘟病毒的仔猪会先后出现以下症状:体温升高达41 ℃,仔猪常伴有厌食、腹泻,眼结膜潮红发炎,皮肤发炎,共济失调,甚至后躯麻痹,粪便由褐色变黄色,后期肛门失禁,粪便沿着后腿淌下,恶臭异常。病猪迅速消瘦,腹下部及耳根皮肤呈紫红色淤血。病猪体温保持在40 ℃左右,症状时轻时重,食欲时好时坏,粪便时干时稀。病程长者皮肤出现淤血斑和坏死块,以腹下部为常见。有时也出现紫耳朵、干尾巴、紫斑蹄。病猪的皮肤一旦破损或扎针后,局部淌血不止,血液凝固不良,也是该病的特征之一。

温和型猪瘟的病理变化主要特征性病变是胃黏膜大面积脱落、充血,肾脏不肿大,呈土黄色,可见大小不等的出血点,以针尖大小居多,脾脏肿大,色暗,表面散在有米粒大小的紫红色突起,质地较软,边缘有坏死灶,个别呈点状出血,淋巴结肿胀、水肿或出血、重者出现化脓、坏死、溃疡等病变,血液稀薄如水,流在地面上很少凝固,其他脏器病理变化不大。部分猪出现咽峡、软腭处和扁桃腺有白色坏死点、出血或溃疡,大肠回盲瓣可见钮扣状溃疡。胆肿大,其边缘出血,呈暗红色。

2 病毒性腹泻的生物学检测技术

猪被PEDV、TGEV、PDCoV、PoRV、PBoV感染后,都会出现呕吐和水样腹泻,致使发病猪脱水、生长不良、体重减轻,死淘率高达 90%以上。剖检病变主要在小肠,可以发现肠壁变薄并且呈半透明状,弹性不足,黏膜充血,肠管内含大量液体,肠系膜淋巴结有水肿、充血等病变。胃内充满着白黄色的固体乳状物,胃黏膜充血。排出的稀粪中会含有没有完全消化的白黄色凝乳块,具有腥臭气味。

临床上很难鉴别这几种病毒病,所以鉴定需要进行实验室相关的分子生物学技术进行鉴别诊断,通常有以下几种检测方法:

2.1 RT-PCR

PCR技术以其快速、敏感、易于操作等优点在近年来被广泛应用。根据 Genbank中选定病毒的一个基因保守区域基因序列设计引物,合成特异引物,然后从感染病毒的粪便或肠道组织中提取总RNA,以此总RNA 为模板,用下游特异引物将RNA 反转录为cDNA,然后在2个特异引物存在的情况下用Taq DNA 聚合酶进行扩增,合成特异的双链DNA 目的片段。对扩增的DNA片段用琼脂糖凝胶电泳进行检测,然后进行测序分析,从而对患病动物进行确诊。PCR能同时检测大批量的样品,并且能进行活体检测,适合于临诊诊断。

2.2 实时荧光定量PCR方法

实时荧光定量PCR方法是在PCR技术基础上发展起来的一种高度灵敏的核酸定量技术,融汇了传统技术灵敏、快速、特异的特点及光谱技术高敏感性和高精确定量的优点,具有特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应等优点。根据病毒设计特异性引物和Taqman探针,采取含病毒多的发病猪的器官组织部位,建立Taqman实时定量RT-PCR检测病毒的方法。不仅适合病毒的临床样品的早期检测,也适用于疫苗生产过程中的质量控制及疫苗制品的效价评估。

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已有 2 评论

  • 。。。。。龙

    。。。。。龙

    希望相关部门也能加大投入,提高检测设备和技术水平,保障养猪业的发展和猪肉的质量安全。

    2023-09-10 17:08

  • 泪是咸的心是痛的你是她的

    泪是咸的心是痛的你是她的

    猪病毒性腹泻的诊断方法和检测技术真的很重要,及早发现能够有效控制疫情传播,保障猪的健康,希望相关科研人员能够不断深入研究,提高检测水平。

    2023-05-10 22:00

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