消毒药对发酵床微生物的影响

环保生态养猪是利用自然环境中的生物资源，一般是采集土壤中的多种有益微生物，对其进行选择、培养、检验、扩繁，形成有相当活力的微生物母种，再按一定比例将母种、锯木屑、辅助材料、活性剂、食盐等进行混合、发酵形成有机垫料。在经过特殊设计的猪舍里，填上上述有机垫料，再将猪关入圈舍。猪排出粪尿被垫料里微生物的活力降解，形成的一种无污染、零排放的有机农业技术。许多养猪户因此一直不敢使用常规消毒药对发酵床进行消毒，生怕影响微生物降解能力而造成死床，本试验在大兴区动物卫生监督管理局支持下，采用2种消毒药对其消毒后，通过垫料中的微生物菌落总数的变化，初步观察这两种消毒药对发酵床微生物的影响效果。

1材料

1．1试剂与设备

牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、硝酸钾、硫酸亚铁、磷酸氢二钾、淀粉、硫酸镁、葡萄糖、发酵床垫料、二氧化氯和威特消毒王。

1．2设备

培养箱、压力消毒锅、天平等。

1．3样品

发酵床垫料均来自大兴区石垡养猪场。

2方法

2．1培养基的制作

2．1．1细菌培养基(牛肉膏培养基)

蛋白胨1．0g，氯化钠0．5g，琼脂2g，0．3g牛肉膏，放入烧杯，加入100mL双蒸水，放在电炉上加热，溶解后用10％氯化钠调pH值至7．2～7．6，再定容至100mL，倒入三角烧瓶，高压备用。

2．1．2真菌培养基(萨市培养基)

蛋白胨1g，琼脂2g，倒入烧杯，加双蒸水定容至100mL，电炉加热溶解后，加入4g葡萄糖，溶解后高压备用。

2．1．3放线菌培养基

硝酸钾1g，硫酸亚铁0．1g，磷酸氢二钾0．5g，淀粉20g，硫酸亚铁0．5g，琼脂20g，氯化钠0．5g，加水1000mL，待加热溶解后，调pH值7．2～7．4mL，定容至1000mL，倒入三角烧瓶，高压备用。

2．2培养基选择

取1g消毒前发酵床垫料，倒入试管，加入l0mL蒸馏水浸提后(10倍稀释垫料)，取l00μl加入装有900l的双蒸水试管中，混匀后标记试管l(10-1)，依次类推，依次10倍稀释至2(10-2)、3(10-3)、4(10-4)、5(10-5)、6(10-6)、7(10-7)、8(10-8)、9(10-9)试管中，从7、8、9试管中分别取l00l涂布在装有细菌培养基、真菌培养基、放线菌培养基的培养皿中，每个样品用平板涂布重复3次，然后放入30°C培养箱，24h观察。

2．3消毒实验步骤

先用二氧化氯对3个发酵床进行消毒试验，消毒后前两天按照消毒0h，4h，8h，20h，48h取样。每个时段每个发酵床分别用探头取发酵床中间和东南角纵向0cm，-5cm，-15cm，-30cm4个层面的垫料样品，按“2．2”操作步骤，取10-6浓度涂布到细菌培养基，使用划线平板计数法，测定消毒后各点微生物细菌总数的变化。

3结果

3．1选择细菌培养基

垫料先加入10mL蒸馏水浸提后，再选择l0-6浓度涂布细菌、真菌、放线菌三种培养基，结果显示：细菌培养基观察菌落数量变化相对稳定，效果最好，随后按此方法进行2．3消毒实验。

3．2二氧化氯消毒后发酵床的细菌总数的变化

由图l可以看出，二氧化氯消毒剂消毒过的发酵床上的细菌数量随着消毒后时间的增加，细菌数量呈现一个先下降后上升过程。下降的过程说明是消毒剂起作用杀灭细菌的过程，上升过程说明，随着消毒后时间的延长，消毒剂的作用降低，细菌开始复苏。不同取样层细菌数量在消毒后48h．分别恢复到了60％以上。但是不同取样层细菌数量随着时间的延长呈现出不同的变化趋势，0cm层细菌数量变化在消毒后迅速降低，在4h后降到最低，随后开始逐渐增加。而一5cm和一l5cm则分别在8h后降到最低，一15cm层的垫料中细菌数量比一5cm的变化幅度小。一30cm层的细菌数量在整个过程中变化不大，普通的消毒对30cm以下的垫料的细菌数量几乎没有影响。

3．2威特消毒王消毒后发酵床的细菌数量的变化

由图2可以看出，威特消毒王消毒剂消毒过的发酵床上的细菌数量与二氧化氯的变化趋势相同，随着消毒后时间的增加，细菌数量呈现一个先下降后上升过程。不同取样层细菌数量也在消毒后48h分别恢复到了70％以上。随着消毒后取样时间垫料的细菌数量变化也呈现了与二氧化氯消毒剂相似的变化趋势。

4讨论与分析

4．1据垫料微生物菌种选择培养基

石垡养猪场发酵床垫料菌种系我院郭秀山老师提供的土著菌，此菌种结合当地的土著微生物等自然资源经多次改进使用，效果非常好。该菌种情况较为复杂，主要包含酵母菌、曲霉菌、放线菌、乳酸菌及一些有益的细菌微生物等，经多次采用3种培养皿进行菌落培养，放线菌和真菌培养基上菌落数量少，细菌培养基菌落数量相对较稳定，是我们测定菌落总数消长变化的最佳培养基。

4．2消毒药的选择

消毒剂种类繁多，选择何种消毒药进行本次试验，分别考虑了以下3种情况：一是不同类型的病原微生物对不同类型的消毒剂有不同敏感性，尽量选择不破坏酵母菌的爱迪什、碘伏等消毒药进行消毒。二是选择当地动物卫生监督检疫局经常分送给百姓使用的药物。三是经药物对比试验，效果较好的消毒药，如威特消毒药是经规模猪场消毒效果检测后，因其药效稀释倍数较大、药效较高、维持时间较长而被经常使用的一种消毒药。结合上述多种情况，最后按二氧化氯和威特消毒王说明书标准使用量进行消毒。

4．3消毒药作用分析

经分析，使用二氧化氯和威特消毒王后消毒后，对0cm，一5cm，一l5cm三个层面的垫料菌数有些影响，但经48h后细菌数量随着时间的延长开始复苏，至于用其他消毒药能不能造成菌落数量衰退而出现死床现象，还有待于进一步研究试验。使用消毒药的过程中，如果观察到垫料对粪便降解能力下降，可及时喷洒营养剂缓解或清除垫料表层，仍不失为亡羊补牢的最好办法。