猪细小病毒病研究进展

一、病原学特征

猪细小病毒（PPV）是属于细小病毒科，细小病毒属的无囊膜单链DNA病毒，成熟的病毒粒子为等轴二十面对称体，直径18～20 nm。该病毒只有一个血清型，能够在PK15、新生仔猪肾细胞等生长，并产生细胞病变。PPV具有血凝活性，能够凝集人O型、大鼠、小鼠等的红细胞，其中以豚鼠的红细胞最敏感。PPV对高温的抵抗力很强，70℃加热2 h仍有感染能力；氯仿、乙醚等消毒剂不影响其毒力，只有在甲醛蒸汽、紫外线照射很久的情况下才能消灭该病毒，一般使用2%烧碱液杀灭病毒。

二、流行病学

猪细小病毒病分布广泛，全世界范围内均可发生。该病一年四季均可发生，但在每年4～10月母猪产仔、交配的季节多发。该病呈地方性流行或者散发，本病发生后，猪场可连续几年不断出现繁殖失败。带病猪是该病的主要传染源，可通过分泌物、粪便等排泄物水平传播，也可以通过胎盘由带病母猪传给胎儿，造成死胎；带毒公猪的精液也会通过本交或人工受精传染给母猪。该病的主要传染对象是青年母猪，尤其是头胎母猪感染性极强，病毒进入胎盘可损害胎盘以及胎儿的很多组织器官，导致死胎、木乃伊胎的发生。

三、致病机理

PPV的致病性分为两个方面：首先是母猪受精卵细胞的影响，其次是胎儿发育的影响。PPV 能顽固地吸附在母猪受精卵细胞透明层的外表面，同时部分 PPV 能穿过透明带而进入卵细胞，并且其透明带外的卵细胞层里可以看到细胞碎片。 PPV 还能使母猪的黄体发生萎缩。如果怀孕母猪感染了 PPV，则妊娠黄体发生萎缩，使之失去了正常时抑制排卵和分泌孕酮的功能，造成母猪体外的胎儿处于不利的环境中，最终出现流产、死胎、胚胎死亡、木乃伊化胎儿和不规律的发情周期。

四、临床症状以及病理变化

（一）临床症状仔猪和母猪的急性感染通常表现为亚临床症状 ,但在其体内很多组织器官(尤其是淋巴组织)中均能发现病毒的存在。该病的主要临床症状是：感染母猪发情不正常，久配不孕。妊娠母猪妊娠初期感染时，因死亡胎儿被吸收，而产仔数量减少；中后期感染可出现流产和正常产，产出异常仔（异常仔即表现为死胎、弱胎和木乃伊胎等）。娩出后存活的异常仔猪不能站立，瘦小，体弱，并很快死亡。发生繁殖障碍的母猪除出现流产、死胎、弱仔、木乃伊及发情而不孕等现象外，个别母猪有体温升高、后躯运动不灵活或瘫痪、关节肿大或体表有圆形肿胀等现象。

（二）病理变化该病的病理变化主要体现为母猪子宫内膜有轻度炎症，胎盘不完全钙化，胎儿有被溶解、吸收的现象。感染胎儿还可见充血、水肿、出血、体腔积液、干尸化及坏死等病变。组织学病变为母猪的妊娠黄体萎缩 ,子宫上皮组织和固有层有局灶性或弥散性单核细胞浸润。在胎儿对PPV没有免疫能力的时候感染该病毒，感染胎儿死亡后可见颜色变黑、脱水、木乃伊化等症状，镜检可见多种组织和器官有广泛的细胞坏死、炎症和核内包涵体。胎儿对PPV具有免疫反应之后再感染，不产生明显的细胞病变。镜检可见在大脑灰质、白质和软脑膜内有以增生的外膜细胞、组织细胞和浆细胞形成的血管套为特征的脑膜脑炎变化。

五、诊断方法

（一）初步诊断若在猪场出现多头母猪尤其是初产母猪发生流产、死胎或木乃伊胎，而母猪没有临床症状，可考虑猪细小病毒感染的可能性。另外，也要结合其流行特点、临床症状和病理变化综合考虑，并且需要与猪伪狂犬病、猪繁殖与呼吸综合征、布氏杆菌病等相鉴别。

（二）实验室诊断

1.病原的分离。取流产的胎儿、死产仔猪等材料处理之后接种PK15等对PPV敏感的细胞进行制备。

2.血凝与血凝抑制检测（HA-HI）。该方法是检测 PPV的常用方法：利用该方法检测人工感染 PPV 的猪，5 d后可检测到相应抗体，12 ～14 d 抗体滴度高达 1 024～4 096，并能持续多年检出抗体[1]。待检血清需要首先进行灭活处理，然后用红细胞吸附，再用高岭土吸附以除去或减少血清中非特异性抑制因子。该方法的优点是快速并可以进行大量的诊断；缺点为灵敏度低，特异性不强，只能作为辅助诊断方法。

3.免疫荧光抗体检测方法。取疑似病猪的扁桃体、死胎、木乃伊胎，将其做成冰冻切片，用荧光抗体诊断液染色待检细小病毒标本片：将染色标本片置湿盒中，放入 37℃培养箱作用 30 min ，取出用 PBS（pH 值 7.2～7.6）冲洗和漂洗 15 min，中间需换液 1 次。再用中性蒸馏水冲洗除盐，待标本片自然干燥后，滴加磷酸甘油，盖上洁净的盖玻片，放于荧光显微镜下观察。发现细胞内有亮绿色荧光颗粒集结，而对照无荧光颗粒集结，可判定为阳性。该方法可靠、敏感。

4.ELISA检测方法。刘俊辉等等采用差速离心、透析、聚乙二醇浓缩纯化 PPV制备抗原，建立检测 PPV 血清抗体的间接 ELISA方法。通过对400多份样品的分析，该方法特异性强，易于操作，对于大量血清检测具有省时、便捷、准确的特点，更适应规模化养殖的早期诊断和紧急预防的需要。但是该方法还没有实现检测的标准化。

5.血清中和检测方法（SN）。该方法的原理是利用被检血清的抗体中和 PPV，然后根据培养细胞的病变情况来计算血清抗体的滴度。该方法的优点是特异性强，但是操作比较繁琐，特别是当病毒低剂量时不引起细胞病变，限制了该方法的检测过程。