猪瘟综合防治技术（二）

中国株猪瘟兔化弱毒：中国兽医药品监察所周泰冲等自1954年开始，相继用4株猪瘟病毒分别诱发家兔感染，经过一系列试验，终于选育出一株能够充分适应于家兔的猪瘟，经兔体连续传代适应后发生变异，充分减弱对猪的致病力，却仍然保持坚强的免疫原性。1956年开始在全国推广应用，对控制猪瘟的发生起到了决定性的作用，且被国外广泛应用。

中国兔化弱毒疫苗的生产工艺也不断改进和提高。我国1957年开始推广兔化弱毒苗，最初提倡就地使用。继而研制真空冷冻干燥苗成功，集中生产，统一供应。冻干苗便于保存，成为我国控制猪瘟的有力工具。开始采用家兔脾淋组织制苗，每只家兔所制疫苗可供300头猪免疫。1964年将兔化弱毒接种乳兔，研制成功乳兔苗，对猪仍保持较好的免疫原性和弱毒性。每只乳兔制苗可供1 500头猪使用，大大提高了产量，降低了成本，1965年在全国推广使用。接着又将猪瘟兔化弱毒接种牛，病毒可在牛体内繁殖，脾淋毒价可达到乳兔毒水平，便于就地制苗或生产厂制冻干苗。1975年开始由中国兽医药品监察所组织全国兽医药品厂进行病毒性疫苗转入细胞培养制苗的技术革新，将兔化弱毒接种原代猪肾细胞进行工厂化制苗。1978—1980年有13个生药厂生产猪肾细胞苗。并用细胞毒配制猪瘟、猪丹毒、猪肺疫三联冻干苗，在全国大量使用。为了避免用同源细胞生产疫苗有污染强毒的危险，1980年研制成功绵羊肾细胞苗，1982年奶山羊肾细胞苗和1985年犊牛睾丸细胞苗研制成功，为猪瘟疫苗生产开辟了一条新路。羊肾和犊牛睾丸细胞苗接种猪后3 d可产生免疫力，5 d可产生坚强免疫力，免疫期均测定到一年。

已被世界公认的突出优点是中国兔化弱毒接种不产生病毒血症和脑炎病变。可以安全地免疫接种任何怀孕期的母猪和哺乳仔猪，不影响受精率及存活率，不引起流产、死胎，可安全地用于建立种猪群。

我国上世纪50年代变开始广泛应用兔化弱毒疫苗做预防注射，并在控制我国猪瘟中起到了至关重要的作用。长期以来，我国把猪瘟预防注射作为国策。随着养猪业的不断发展，集约化程度越来越高，规模越来越大，随着不断从国外引进种猪，国内生猪的交易、流通逐日加大等等因素，给猪瘟的防治带来不少困难。虽然普遍注射了猪瘟兔化弱毒疫苗，但各地猪瘟仍时有发生，而且多表现为非典型、慢性及隐性状况，并普遍出现猪瘟的持续性感染和妊娠母猪带毒综合征（母猪带毒，垂直传播感染胎儿，造成死胎、弱仔及先天性震颤等）。持续性感染的根源在于带毒母猪，感染母猪一般不表现任何临床症状，但可导致胎猪的先天性感染。这些猪可长期带毒、排毒感染其他健康猪并具有免疫耐受性。如果这些猪培育成后备种猪又形成新的传染源。

注射疫苗后为什么还不断发生猪瘟呢？这是值得深思及认真对待的问题。前些年有人推测，认为可能是猪瘟兔化弱毒由于多年不断传代而发生变异，位点发生漂移，导致疫苗效力下降、免疫猪不能抵抗野毒的攻击。此外，中国兔化弱毒是否会造成垂直传播？对妊娠母猪及后代是否产生危险？中国兔化弱毒在猪体内保毒时间有多长？

我们最近几年对以上问题做了一些初步的研究，现介绍如下：

2.1.1 中国兔化弱毒疫苗的效力试验

用我国生产的猪瘟兔化弱毒牛睾丸细胞苗免疫无猪瘟抗体及抗原的易感猪（每头皮下注射1头份），14 d后分别攻击株猪瘟野毒（每头注射猪瘟血毒2 mL）。结果表明：猪瘟弱毒细胞苗对9株野毒均具有坚强的保护力，免疫组18/18（100%）保护，对照组13/17（76.5%）死亡（见表1）。以猪瘟荧光抗体法（HCFA）检查，攻击前的免疫猪及对照组均为阴性，即不存在猪瘟，而所有对照组猪于攻击后第1周（个别猪第2周）直至试验结束（3～5周）均为阳性，即均带毒（见表2）。此外，我们也进行过用2株、3株甚至4株不同野毒的联合攻击，免疫猪也完全保护，足以证明其具有坚强的保护力。试验发现，由于野毒的毒力高低不同，攻毒后非免疫猪临床表现、至死亡的时间有所不同，最短的12 d，一般的20 d左右，最长的长达79 d，个别甚至不死（但发病、带毒严重）。由此看出，免疫接种猪不但能抵抗所有9株猪瘟野毒的攻击，完全保护，而且在受到野毒攻击后能完全抑制猪瘟野毒在体内的复制，证明中国兔化弱毒疫苗完全有效，完全可以放心使用。

2.1.2 猪瘟兔化弱毒疫苗免疫妊娠母猪的试验

第一次试验用2头分别妊娠86及96 d(妊娠后期)的母猪各免役20头剂（大剂量）的猪瘟兔化弱毒细胞苗，临产前进行剖腹产。于刚产下、产后第7及14 d从每窝仔猪中各取一头仔猪进行解剖，未见异常，取各种脏器制成匀浆注射健康家兔未产生热反应，一周后以猪瘟兔化弱毒进行攻击，全部家兔为定型热，说明这些脏器样品不存在病毒。对所有仔猪脏器进行HCFA检查，全部为阴性，也说明不含病毒。第2次用分别妊娠30、60及90 d的3头母猪分别注射2头剂（普通剂量）的猪瘟兔化弱毒细胞苗，自然分娩。同样于刚产下、产后第7及14 d从每窝仔猪中各取1头仔猪进行解剖，采各种脏器进行与第一次完全相同的试验，结果也未分离到疫苗病毒，也未发现HCFA阳性。我们对这两次试验的所有其余同窝仔猪进行跟踪观察，均发育正常。由此可见，不论以大剂量的猪瘟兔化弱毒疫苗注射妊娠后期的母猪或以普通剂量的相同疫苗注射妊娠前、中、后期的母猪，均未引起繁殖障碍，均未在仔猪中分离到疫苗病毒，可以说明猪瘟兔化弱毒C株不通过胎盘传播，对胎儿不产生有害影响。

2.1.3 猪瘟兔化弱毒在猪体内保毒时间的试验

曾用猪瘟兔化弱毒细胞苗注射4头健康猪，每头肌肉注射1头份。于注射后的第4、7及14 d采扁桃体，以猪瘟荧光抗体法检查，发现第4及第7 d均有病毒，而第14 d病毒已消失，又用此疫苗注射另一批的4头健康猪，每头肌肉注射1头剂。于注苗后第4、7、11及14 d采扁桃体，以猪瘟荧光抗体法及以组织匀浆液注射家兔检查，结果于第4、7、11 d均发现病毒于第14 d消失。也曾将猪瘟兔化弱毒苗接种健康猪后，跟踪扁桃体及其他脏器（淋巴结、脾、肾、肺等）存在的病毒，发现扁桃体的病毒尚可保留到第13 d，而其他脏器组织的病毒仅能保留到第7 d。因此，接种猪瘟兔化弱毒疫苗后，病毒在猪体内保留的时间最多14 d。这与国外诸多报导的时间大致相同。

2.1.4 其他病毒感染对猪瘟疫苗免疫猪效果的影响试验

猪群中，除了可能出现猪瘟病毒感染的情况外，还经常出现一种或多种其他病毒感染，如猪伪狂犬病病毒（PRV）；猪细小病毒（PPV）；猪繁殖与呼吸综合征（PRRSV）等。为了明确其他病毒感染对猪瘟疫苗免疫效果的影响，我们曾用20头猪瘟敏感猪随机分为6个组，其中4个试验组各3头猪，分别接种PRV、PPV及PRRSV，以及3种病毒混合接种。感染这些病毒7 d后，连同4头免疫攻毒对照组一起注射猪瘟兔化弱毒细胞苗。13 d后，连同另4头非免疫攻毒对照组攻击猪瘟石门系强毒。

结果表明：感染7 d后，3个单独感染及混合感染的所有动物均为抗原阳性，说明3种其他病毒感染成功，感染14 d后，全部动物的抗体也为阳性。攻击石门毒后14 d，4组其他病毒感染的12头猪出现不同程度的临床症状，其中11头猪检查到很强的HCFV阳性，但均存活。由此可见，PRV、PPV及PRRSV单独感染或3种病毒混合感染，对猪瘟疫苗的免疫效果均造成一定程度的影响。攻击石门毒后，这些猪都存活了，但带毒，证明不能阻断猪瘟病毒在体内的复制。而免疫攻毒对照组不但完全存活且不出现猪瘟病毒，说明已完全阻止了病毒的复制，具有坚决的保护力。4头非免疫对照猪不但全部死亡，且均为HCFA强阳性。由此可见，其他病毒感染造成了对猪瘟疫苗免疫效果的较明显的影响。反之，可以推测，猪瘟病毒的感染也将会影响对其他病毒的免疫效果。因此，在养猪生产中对各种疫病的协同防制是十分必要的。

2.1.5 母源抗体对仔猪免疫的影响

由于母猪几乎都注射了猪瘟疫苗，而且剂量大、频率高，基本处于高免状态，其分泌的初乳的抗体水平也较高，并通过吮吸初乳使仔猪获得母源抗体。这些母源抗体对仔猪的主动免疫反应将会产生抑制作用。

仔猪的母源抗体能持续多久？何时注苗较为合适？如何尽量避免母源抗体的干扰作用？这是猪瘟免疫中的重要问题。门常平等选取北京市某农场免疫母猪的后代仔猪，分成3组，其中两组的母猪在产前又接种猪瘟兔化弱毒疫苗1次，第3组不注射。3组仔猪于不同日龄用石门系强毒攻击，并根据保护情况判定母源抗体的存在时间，见表3。

由表3可见，免疫母猪在产前再注射1次兔化弱毒疫苗，并不能提高仔猪的母源抗体趋势。

免疫母猪所产仔猪的母源抗体大致可以维持至30日龄左右。至40日龄时已经完全没有保护力。门常平等又对已有母源抗体的仔猪进行疫苗接种，随后再作强毒攻击试验，结果如表4。

由表4可见，具有母源抗体的仔猪15～25日龄时注射疫苗，其保护力持续时间不超过65日龄。在这种情况下，需要60日龄时再作第二次疫苗接种。

关于仔猪哺乳注射疫苗问题，人们通常称为“乳前免疫”、“零时免疫”或“超前免疫”，即在仔猪出生后先剥夺吮吸初乳，注射疫苗后隔一定时间再吮吸。这是在无法解决母源抗体的干扰情况下提出来的。在仔猪没有吸吮初乳以前注射兔化弱毒苗，可以使其产生主动免疫力，这是因为：①猪胎发育到70 d时的免疫系统已经对抗原刺激产生应答，形成抗体，故在仔猪出生时估计其免疫系统已经相当成熟；②初生仔猪在吮吸初乳后获得的抗体在吸乳3 h后就可由其血流中检出，至6～12 h，血流中的抗体含量已达最高峰。如在仔猪血流抗体达最高峰以前接种兔化弱毒苗，可使弱毒株在体内有足够的增殖时间，不致被血流中的抗体所中和；③猪瘟兔化弱毒株对乳猪无残余毒力，十分安全，可以大胆使用。