猪流行性腹泻的系统诊断方法（返饲病料制备与效果评价）

猪流行性腹泻(PED)是由猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起的一种急性接触性肠道传染病，以水泻、呕吐和脱水为特征。我国于20世纪80年代初开始陆续有该病的流行，其中有30%～40%的病例与猪传染性胃肠炎(TGE)混合感染;2010年10月，东南亚多国出现新生仔猪病毒性腹泻，并波及我国南方10多个养猪大省，死亡仔猪超过100万头;2011年12月中旬起，该病在华东地区多家规模化猪场再次暴发;美国自2013年首次暴发此病后，2014年4月再次暴发且疫情迅速蔓延至墨西哥等国家。近年来，该病已呈世界性分布，给养猪业造成了巨大的经济损失。

一、诊断方法

根据流行特点、临床症状和鉴别诊断做出初步判定，再进行病原学、血清学检测，结合PCR技术确定病原体。

1.流行特点。PED常年均可发生，以冬春季发病为重，我国多于每年11月至翌年4月流行此病。各种年龄的猪均易感，尤以哺乳仔猪最易感且病死率高。其中，哺乳仔猪、保育猪或育肥猪的发病率可达100%，母猪发病率15%～90%;7日龄以内仔猪越小，症状越重，发生腹泻后2～4天脱水死亡，死亡率高达70%～100%，7日龄以上仔猪持续3～4天腹泻后可能会死于脱水，死亡率为50%～90%;育肥猪死亡率为1%～3%;成年猪感染后一般经4～5天即可康复。

病猪是主要传染源，感染途径主要是粪—口途径。病毒存在于肠绒毛和肠系膜淋巴结中，随粪便排出后，污染饲料、饮水、衣服、鞋子、车辆及工具等而散播传染。根据感染毒株的毒力和猪的敏感程度不同，其潜伏期为：哺乳仔猪8～36小时，保育猪和育肥猪1～3天。发病顺序一般为：育肥猪—保育猪—妊娠母猪—产房母猪和哺乳仔猪。

2.临床症状。育肥猪、保育猪和母猪表现水样腹泻，粪便呈水泥浆样或黄色;保育猪消瘦，体表沾满稀粪，多扎堆取暖;产房母猪常出现乳房萎缩，奶水不足。

哺乳仔猪最早出生后12小时内就出现呕吐，随后开始腹泻，粪便呈黄、棕、白等色，脱水后畏寒，多数很快死亡;耐过猪一般成为僵猪或弱仔，表现为精神沉郁、眼睛无神、皮肤无弹性、生长缓慢且消瘦。

3.剖检病变。发病仔猪胃内充满未消化的乳糜，胃底黏膜可见不同程度的充血;小肠病变明显，肠管膨满扩张、肠壁透明，肠系膜充血、肠系膜淋巴结水肿;肠内充满大量黄色液体，呈水样或黏液样，有异味;肠绒毛萎缩变短，上皮细胞变性坏死和脱落;肾脏表面散布大量针尖状出血点，其他脏器无显著一致性病变;常见机理不明的背部肌肉坏死。

4.鉴别诊断。主要与猪瘟、传染性胃肠炎、轮状病毒病、伪狂犬病、博卡病、仔猪白痢、仔猪黄痢、仔猪红痢、副伤寒、猪痢疾、增生性肠病、等孢球虫病引起的腹泻相区别。

5.实验室诊断。

(1)PEDV快速诊断试纸条(初诊)。由韩国Ani-gen公司生产，操作简单，快捷。

(2)直接免疫荧光法。能快速、敏感、可靠地检测出样品中的病毒抗原。荧光显微镜检查判定：在胞浆中见到特异性苹果绿色荧光为阳性，无特异性荧光为阴性。

(3)RT—PCR或RT—nPCR检测。是一种快速、高度敏感、特异的诊断方法。应用外引物从病猪粪便中扩增出DNA片段，琼脂糖凝胶电泳分析为854bp的目的基因片段，可初步断定导致猪群发病的病原体中含有猪流行性腹泻病毒;进一步用内引物经嵌套式PCR扩增出的DNA片段，琼脂糖凝胶电泳分析为412bp的目的基因片段，可确定导致猪群发病的病原体为猪流行性腹泻病毒。