一例猪伪狂犬与大肠杆菌混合感染病例的诊治与讨论

一例猪伪狂犬与大肠杆菌混合感染病例的诊治与讨论

夏炉明，陈琦，卢军，李维功，孙泉云

上海市动物疫病预防控制中心

近年来，随着集约化养猪业的发展，猪群疫病日渐复杂多样，总体呈现呼吸道疾病、消化道疾病和免疫抑制病多发，病原的混合感染、多重感染和细菌性继发感染现象普遍。笔者曾诊治一起保育猪混合感染猪伪狂犬病和大肠杆菌病的病例，现报告如下：

1发病情况

2013年3月初，某规模猪场4窝生产母猪所产仔猪发病，主要发病日龄为保育后10d～15d，临床症状表现为高热（41℃），被毛粗乱，厌食，虚弱，后期呼吸急促，有抽搐、转圈等神经症状。

2免疫情况

生产母猪免疫某进口品牌猪伪狂犬疫苗，1头份／头，一年3次；肉猪免疫某国产品牌猪伪狂犬疫苗，采用滴鼻＋肌注方式。其它疫病均按照免疫程序正常免疫。

3病理剖检

对该规模猪场送检的3头病死猪进行病理解剖，可见喉头黏膜溃疡，肠道出血，脑充血、出血，肺脏出血，肾脏髓质部出血，其它部位症状不明显。对解剖死亡猪病例进行无菌采样，采集样品包括心脏、肝脏、脾脏、肺、扁桃体和脑组织。

4实验室诊断

4.1涂片镜检

将无菌采集的心、肝、脾和肺等组织样品进行涂片、革兰氏染色、镜检，涂片上发现两端钝圆、散在或成对的革兰氏阴性杆菌。

4.2细菌分离培养

将无菌采取的心、肝、脾、肺等组织涂抹于巧克力琼脂培养基，5％CO2、37℃培养24h后，生长出呈圆形、凸起、湿润、光滑、灰白色、直径约2mm～3mm的菌落。挑取该菌落涂片、革兰氏染色、镜检，亦可见两端钝圆、散在或成对的革兰氏阴性杆菌。

4.3鉴别培养

挑取初次分离培养菌落，分别接种伊红美蓝（EMB）琼脂培养基和三糖铁（TSI）琼脂培养基，37℃培养24h后在伊红美蓝琼脂上产生黑色带金属光泽菌落，而三糖铁琼脂培养基变黄，由此鉴定分离培养的细菌为大肠杆菌。

4.4药敏试验

将纯化的菌落接种MH血琼脂培养基，涂抹均匀，选取药敏纸片贴于培养基上，37℃培养24h，测量抑菌圈直径并判定，结果表明：环丙沙星最敏感，氧氟沙星和恩诺沙星中度敏感，其它抗生素均有耐药性。

4.5猪伪狂犬gpI抗体ELISA检测

采集3头母猪血样，按照猪伪狂犬gpI抗体ELISA检测。试剂盒说明（IDEXX公司）进行猪伪狂犬病抗体（gpI基因缺失）检测，结果表明其中两头母猪血清中猪伪狂犬病毒野毒感染抗体阳性。

4.6荧光PCR检测

将采集发病猪的脾脏、肺脏、扁桃体和脑组织剪碎，在研钵中研磨，7500R/MIN离心5MIN取上清液，采用滤膜提取法抽提组织样品的DNA和RNA，按照荧光（RT－）PCR试剂盒的实验步骤进行猪蓝耳病病毒（PRRSC）、猪瘟病毒（HCV）、猪伪狂犬病毒（PRV）和猪圆环病毒（PCV）检测。

实验结果表明：荧光（RT－）PCR反应体系的阴阳性对照成立，3份样品只有PRV有明显扩增曲线，其余3种病毒均无扩增曲线。

根据场主临床病例症状描述、病理剖检和实验室诊断，综合诊断该病例为猪伪狂犬病毒和大肠杆菌混合感染。

5防治措施

5.1隔离消毒

将可疑猪和发病猪换舍隔离，病死猪及其污染物送无害化处理站及时焚烧，对圈舍和四周环境进行严格消毒，搞好环境卫生，增加消毒频率。

5.2紧急预防接种

仔猪用进口猪伪狂犬疫苗进行紧急预防接种，先免疫健康猪，后接种可疑猪和发病猪，一猪一针头，针头用沸腾开水消毒。生产公母猪免疫猪伪狂犬病疫苗时适当加大剂量。

5.3药物治疗

对高烧不退、病情严重的猪肌注安乃近＋环丙沙星，注射1次/d，连用3d～5d，同时口服补液盐。全群拌料给药，黄芪多糖＋环丙沙星＋优质多维，连喂5d～7d，同时加强饲养管理。

按照以上措施处理一周后，除个别病重猪死亡外，其余病猪逐渐痊愈，病情得到了有效控制。

6讨论

猪伪狂犬病自2012年以来有明显抬头趋势，本病多发于寒冷、气温多变的秋、冬、春季，有一定的季节性。主要表现为怀孕母猪流产，仔猪、保育猪腹泻和神经症状，仔猪和保育猪的死亡率较高，并且有的发病猪群曾接种过猪伪狂犬病疫苗，规模猪场反映犬吃了病死猪的内脏感染发病死亡，推断猪伪狂犬野毒的毒力可能在免疫应激等因素作用下增强。

但猪伪狂犬病病毒属于DNA病毒，变异不会很大，是否出现“超强毒株”，或者不同疫苗毒株之间、疫苗毒株与野毒株之间是否出现基因重组，这还需要进行病毒变异分析和毒力检测予以进一步证实。

防控猪伪狂犬病最好的措施是免疫接种，选择疫苗时应考虑毒株、抗原含量和佐剂等因素。对于猪伪狂犬病疫苗来说，世界上用的最多的是BARThA株，因为其gE基因自然缺失，无毒力返强的风险，安全性高，血清学检测方面便于和野毒区分。但值得注意的是在同一个猪场内不宜反复或同时接种两种不同的基因缺失疫苗，以避免疫苗毒株间的重组。

此外，规模猪场应执行良好的猪伪狂犬病监测计划和疫病净化措施，加强定期检测，及时淘汰抗原阳性猪以及抗体持续阴性猪，同时根据猪场的野毒感染状况及时调整疫苗免疫频率和免疫剂量等。

目前在临床上多见猪伪狂犬病病毒与其它病毒或者细菌等混合感染，使病情复杂化，增大了猪的发病率与死亡率，应引起重视。规模猪场除加强科学的饲养管理和全面落实卫生防疫措施之外，要认真做好各种疫病的免疫接种工作，对猪群进行保健预防，提高猪群综合抵抗力，同时严禁饲喂发霉变质的饲料、滥用抗生素和激素类药物等。