猪玉米赤霉烯酮中毒确诊方法

感观检查

将购买的玉米直接堆放在新盖平房的水泥地面上，开包检查，闻有霉味，发现有的玉米粒表面长有白色绵丝状物；粉碎的剩余玉米也有霉味。

原分离培养

取玉米粒和混合饲料样，0.1%升汞消毒1min，无菌蒸馏水冲洗，然后将样品分别无菌接种于加有抗菌素的卡贝克(czapek)琼脂培养基平皿各5个，另设3个无菌蒸馏水对照培养基平皿，25～28℃培养72h。接样培养基都长有白色绒丝状物，取培养物涂片，乳酸酚棉蓝染色镜检，见有分隔菌丝和孢子，大分生孢子呈镰刀状、中间有2～5个隔，小分生孢子多为卵圆形细胞;而对照培养基平皿均未见类似菌落。

毒素检测

随机抽取玉米样和混合饲料样，玉米赤霉烯酮毒素提取和气相色谱测定参考文献的方法进行。测得玉米样和混合饲料样中玉米赤霉烯酮的含量分别为2.51mg/kg和1.85mg/kg。挑取上述病原分离培养物，以pH8.0的PBS液稀释，用0.3μm滤膜过滤除菌，将少量过滤液接种到长成单层的PK15细胞上，36h后，细胞质浓缩、颗粒化，核浓缩、碎裂、液化，细胞呈中毒样病变;而未接种过滤液的细胞生长正常。根据发病情况、临床症状、实验室检查，初步诊断为镰刀菌引起的猪玉米赤霉烯酮中毒。