五种药物对结肠小袋虫的体外疗效试验

随着规模化猪场的发展，饲养方式的改变，饲养密度的加大，猪结肠小袋虫病的流行非常普遍，尤其在南方地区，感染率高达20％~l00％。猪结肠小袋虫病可引起猪消化不良性下痢，降低饲料的利用率，从而影响了猪场的经济效益。为筛选出对猪结肠小袋虫有效的抗寄生虫药物，笔者进行了结肠小袋虫的体外药物疗效观察试验，现报道如下。

材料与方法

材料

病料采集

病料来自长沙市郊区某自然发病猪场，粪便镜检结肠小袋虫为阳性。取结肠小袋虫阳性的新鲜猪粪便，用尼龙网兜淘洗法收集包囊，用生理盐水保存于冰箱中备用。

试验试剂

氯化钠、氯化钾、氯化钙、氯化镁、磷酸二氢钠、磷酸二氢钾等，均为分析纯；灭能血清，青霉素，链霉素，消毒米粉，生理盐水等。

试验药物

甲硝唑、复方新诺明、土霉素、芬苯达唑、伊维菌素。将上述药物分别用灭菌蒸馏水配制成0．5％、l％、2％、3％、5％五个浓度。

试验方法

洛克氏液(Ringer液)的配制

洛克氏液配方为：氯化钠8g，氯化钾0．2g，氯化钙0．2g，氯化镁0．01g，磷酸二氢钠2g，磷酸二氢钾0．3g，蒸馏水l000mL。配制时，氯化钙和氯化镁另装小瓶，高压灭菌后再混合。

RSS培养液的制备

取一支15mL灭菌试管，加Ringer液7mL、灭能牛血清0．4mL、消毒米粉适量(约20mg)，再加青、链霉素各1万单位，加盖棉塞备用。

结肠小袋虫的接种培养

把装有RSS培养液的培养管置恒温箱中预温15分钟后，每个培养管接种含结肠小袋虫包囊的病料0．5ml，混匀后加盖棉塞，置于37℃恒温箱中培养。每隔12h涂片观察l次培养管中结肠小袋虫滋养体的发育情况和形态变化，并统计每个视野中滋养体的数量。培养24h一36h后，经镜检含大量滋养体时，开始转种，作为药物杀灭试验的样本。

试验分组

选用甲硝唑、新诺明、土霉素、芬苯达唑、伊维菌素作为结肠小袋虫的体外杀灭试验用药，以上药物各为l组，每组5个浓度，各设l个对照，分别加入含有结肠小袋虫滋养体的培养管中。每管加入试验药物l．5mL(对照组加入1．5mL蒸馏水作对照)，每半小时观察1次各种药物浓度对滋养体发育和数量的影响。

滋养体的统计方法和药效判定标准

把培养管摇匀，用吸管吸一滴培养液于载玻片上，盖上盖玻片，在100倍镜下观察不少于20个视野，记录滋养体数量，并计算每个视野内滋养体的平均数。如连续观察3个玻片未见滋养体，则判为滋养体消失，记录为0，否则以最多的1片计算。初次判定滋养体消失的样本，需在24h、48h后再观察2次，以证实判断。

统计不同药物浓度条件下滋养体存活的时间和数量的变化，作为体外药物效果的判定依据。加入药物后，滋养体的存活时间越短、则说明药物效果越好。

结果与分析

5种药物体外杀灭的结果见表1、表2、表3、表4和表5。

甲硝唑组各浓度药物对滋养体的杀灭效果最好，而且作用最快。投药后最快的在30min内虫体活动就变慢、表面变粗糙，并发生崩解、死亡现象。各浓度药物致滋养体全部死亡的时间分别为：1．5h、2h、2．5h、3h、5h，对照组的滋养体则大量繁殖，最长存活240h。

新诺明组各浓度药物对滋养体有一定的杀灭效果，最快的6h虫体即有反应。各浓度药物致滋养体全部死亡的时间分别为：7h、18h、24h、32h、72h，对照组的滋养体则大量繁殖，最长存活120h。

土霉素组各浓度药物对滋养体的杀灭效果较慢，最快的8h虫体才有反应。且1％和0．5％的药物浓度对滋养体没有明显的作用效果。5％、3％、2％浓度致滋养体全部死亡的时间分别为：10h、12h、20h。

芬苯达唑和伊维菌素对结肠小袋虫的滋养体没有杀灭作用。加入药物后，和对照组一样，滋养体都能存活140h以上。

讨论

1．本研究采用尼龙网兜淘洗法收集阳性粪便中的结肠小袋虫包囊，并保存于生理盐水中，再作为培养接种的病料。该方法与直接用阳性粪便接种法相比，能减少培养液中的杂质，这样就能更清晰地观察涂片中滋养体的形态、活动和分裂情况。从试验结果来看，把保存于生理盐水中的结肠小袋虫包囊接种于RSS培养液中，在37℃恒温条件下，培养14h～24h后即能发育成大量滋养体，并能很好地生长和繁殖。

2．试验表明，甲硝唑、复方新诺明、土霉素对结肠小袋虫均有一定的杀灭效果，而且药物浓度越大，杀灭效果越好。但从作用时间和药物浓度上来看，以甲硝唑的效果最好，而新诺明和土霉素则作用较慢，．这与杨月中等和刘银贵等的报道结果一致。

3．试验结果表明，芬苯达唑和伊维菌素对结肠小袋虫滋养体没有杀灭作用，而这两种药物是兽医临床上用得最多的抗寄生虫药物。因此，规模化猪场通过寄生虫监测，一旦确定有猪结肠小袋虫大量感染时，一定要选用甲硝唑等有效的药物进行控制。

4．猪结肠小袋虫作为肠道常住寄生虫，临床上难以将其彻底消灭。况且，它形成包囊后对外界的抵抗力较强，容易通过被污染的饲料和饮水传播，引起本病的广泛流行。因此，控制本病的流行最好是通过多次全群控制用药，减少感染，切断结肠小袋虫的传播链，达到全群总体控制的目的。

摘自《中国动物保健》.-2009，（3）.-107~109